Dergiler / Turkish Journal of Pharmaceutical Sciences / 2021 / Cilt: 18 - Sayı: 6
Basit Sıvı-sıvı Ekstraksiyon Tekniği ile İdrar Dopamin Düzeylerinin Kantitatif Tayini için Hızlı, Kesin ve Hassas Bir LC-MS/MS Yöntemi
- Sayfa
- 761–769
- DOI
- —
Özet
kardiyovasküler ve renal fonksiyonların düzenlenmesinin daha iyi anlaşılmasını sağlar. Bu çalışmanın amacı, idrarda DA’nın rutin klinik kantitasyonu için hızlı, kesin ve son derece hassas olan sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi geliştirmektir. Gereç ve Yöntemler: İdrar numuneleri, basit ve hızlı bir sıvı-sıvı ekstraksiyon tekniği ve ardından çoklu reaksiyon izleme modu kullanılarak geliştirilen hassas bir LC-MS/MS yöntemi ile hazırlanmıştır. Bulgular: DA ve internal standardın alıkonma zamanları sırasıyla 2,28 ve 2,24 dakika olarak bulunmuştur. İdrarda DA ve DA-IS’nin ortalama ekstraksiyon geri kazanımı %95,62’nin üzerinde belirlenmiştir. İdrardaki DA kalibrasyon eğrisi, 20 ila 1000 ng/mL arasında doğrusaldır (r2≥0,998). Maksimum gün içi ve günler arası kesinlik sırasıyla 5,87 ve 2,81 ve varyasyon katsayıları sırasıyla %10,55 ve %7,57’dir. Sonuç: Türevlendirme, buharlaştırma, yeniden yapılandırma veya iyon eşleştirme reaktifleri kullanılmadan, DA’nın hızlı, hassas ve kantitatif LCMS/ MS yöntemi ile tespiti, invazif olmayan numune ve temel nörobilim ve ilaç geliştirme çalışmaları gibi klinik laboratuvar uygulamaları için kolay hazırlama tekniği ile geliştirilmiştir.
Abstract
Objectives: Dopamine (DA) is a prominent biochemically complex neurotransmitter and immunomodulator. The quantification of DA could contribute to a better understanding of how endocrine system, cardiovascular and renal functions are regulated. The study aims to develop a rapid, precise, and extremely sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for routine clinical quantification of DA in urine. Materials and Methods: Urine samples were extracted via one simple and rapid liquid-liquid extraction technique; then analyzed using a sensitive LC-MS/MS method developed by multiple reaction monitoring mode. Results: DA and internal standard (IS) retention durations were found to be 2.28 min and 2.24 min, respectively. The mean extraction recovery of DA and DA-IS in urine was above 95.62%. DA calibration curve in urine was linear (r2≥0.998) ranging from 20 ng/mL to 1000 ng/mL. The maximum intra-day and inter-day precisions were 5.87 and 2.81, respectively and coefficients of variation were 10.55% and 7.57%, respectively. Conclusion: A rapid, precise, sensitive and quantitative LC-MS/MS detection of DA without the use of derivatization, evaporation, reconstitution and ion-pairing reagents has been developed with a simple and non-invasive sample technique for clinical laboratory applications, basic neuroscience research and drug development studies.