A Rapid, Precise, and Sensitive LC-MS/MS Method for the Quantitative Determination of Urinary Dopamine Levels via a Simple Liquidliquid Extraction Technique

Basit Sıvı-sıvı Ekstraksiyon Tekniği ile İdrar Dopamin Düzeylerinin Kantitatif Tayini için Hızlı, Kesin ve Hassas Bir LC-MS/MS Yöntemi

Abstract

Objectives: Dopamine (DA) is a prominent biochemically complex neurotransmitter and immunomodulator. The quantification of DA could contribute to a better understanding of how endocrine system, cardiovascular and renal functions are regulated. The study aims to develop a rapid, precise, and extremely sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for routine clinical quantification of DA in urine. Materials and Methods: Urine samples were extracted via one simple and rapid liquid-liquid extraction technique; then analyzed using a sensitive LC-MS/MS method developed by multiple reaction monitoring mode. Results: DA and internal standard (IS) retention durations were found to be 2.28 min and 2.24 min, respectively. The mean extraction recovery of DA and DA-IS in urine was above 95.62%. DA calibration curve in urine was linear (r2≥0.998) ranging from 20 ng/mL to 1000 ng/mL. The maximum intra-day and inter-day precisions were 5.87 and 2.81, respectively and coefficients of variation were 10.55% and 7.57%, respectively. Conclusion: A rapid, precise, sensitive and quantitative LC-MS/MS detection of DA without the use of derivatization, evaporation, reconstitution and ion-pairing reagents has been developed with a simple and non-invasive sample technique for clinical laboratory applications, basic neuroscience research and drug development studies.

Özet

kardiyovasküler ve renal fonksiyonların düzenlenmesinin daha iyi anlaşılmasını sağlar. Bu çalışmanın amacı, idrarda DA’nın rutin klinik kantitasyonu için hızlı, kesin ve son derece hassas olan sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi geliştirmektir. Gereç ve Yöntemler: İdrar numuneleri, basit ve hızlı bir sıvı-sıvı ekstraksiyon tekniği ve ardından çoklu reaksiyon izleme modu kullanılarak geliştirilen hassas bir LC-MS/MS yöntemi ile hazırlanmıştır. Bulgular: DA ve internal standardın alıkonma zamanları sırasıyla 2,28 ve 2,24 dakika olarak bulunmuştur. İdrarda DA ve DA-IS’nin ortalama ekstraksiyon geri kazanımı %95,62’nin üzerinde belirlenmiştir. İdrardaki DA kalibrasyon eğrisi, 20 ila 1000 ng/mL arasında doğrusaldır (r2≥0,998). Maksimum gün içi ve günler arası kesinlik sırasıyla 5,87 ve 2,81 ve varyasyon katsayıları sırasıyla %10,55 ve %7,57’dir. Sonuç: Türevlendirme, buharlaştırma, yeniden yapılandırma veya iyon eşleştirme reaktifleri kullanılmadan, DA’nın hızlı, hassas ve kantitatif LCMS/ MS yöntemi ile tespiti, invazif olmayan numune ve temel nörobilim ve ilaç geliştirme çalışmaları gibi klinik laboratuvar uygulamaları için kolay hazırlama tekniği ile geliştirilmiştir.