Lipid-protein microdomains in tonoplast of Beta vulgaris L.: comparison between the results obtained by detergent and detergent-free isolation techniques

Beta vulgaris L tonoplastındaki lipid-protein mikro alanları: Deterjanlı ve deterjansız izolasyon tekniklerinin elde edilen sonuçlarla karşılaştırılması

Özet

Amaç: Bitki ve hayvan hücrelerinin membranları, yapılarında lipid-protein mikro alanları (LPM'ler) içerir. Biz bu çalışmada, izole edilen LPM'lerin pancar kökü tonoplastından elde edilen iki teknikle biyokimyasal ve biyofiziksel özelliklerini karşılaştırmayı amaçladık.Yöntemler: Karşılaştırma amacıyla, LPM'lerin biyokimyasal özellikleri, protein içeriği (Bradford yöntemi), lipidlerin içeriği (gravimetrik yöntem) değerlendirilmiştir. Farklı lipidleri ayırmak amacıyla, tek boyutlu ince tabaka kromatografisi (TLC), iki boyutlu TLC ve farklı özel çözücü sistemleri kullanılmıştır. Yağlı asitlerin ve sterollerin içeriği, kromatografik-kütle spektrometresi ve gaz-sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi ile uygun şekilde belirlendi. LPM'lerde lipidlerin sıralamasını belirlemek için, lazer tarama konfokal floresan mikroskobu kullanılmıştır.Bulgular: LPM'lerin biyokimyasal ve biyofiziksel özelliklerinin araştırılması sonucunda belirgin farklılıklar ortaya çıkmıştır. Deterjan içermeyen teknikle tanımlanan LPM'lerde, deterjan tekniği ile tanımlanan LPM'lerden çok proteinlerin toplam içeriği önemli derecede yüksekti (4 kat daha büyük). Deterjansız teknikle izole edilen LPM'lerdeki lipitlerin düzenliliği, deterjan tekniği ile izole edilen LPM'lerden önemli derecede düşüktür.Sonuç: Tonoplastta bu sonuçlar çeşitli LPM türleri bulunduğunu düşündürebilir

Abstract

Objective: The membranes of plant and animal cells contain lipid-protein microdomains (LPMs) in their structure. We aimed to compare biochemical and biophysical characteristics of LPMs isolated by the two techniques from beet root tonoplast.Methods: For the purposes of comparison the biochemical characteristics of LPMs the content of protein (Bradford’s method), the content of lipids (gravimetric method) were assessed. For the purpose of separating different kinds of lipids, one-dimensional thin layer chromatography (TLC), two-dimensional TLC and different specific systems of solvents were used. The content of fatty acids and sterols was determined by chromatography-mass spectrometry and gas-liquid chromatography-mass spectrometry correspondingly. In order to determine the orderings of the lipids in LPMs the laser scanning confocal fluorescence microscopy was used