Yapay Zeka Hızlı Bakış & Çıkarımlar
AI InsightBulgular: “Dedicator of cytokinesis 8” antikoru için ∆MFI değerleri, sağlıklı kontrollerde CD3+ T hücrelerde 21.3±4 iken CD20+ T hücrelerde 25±3.3 olarak belirlendi. “Dedicator of cytokinesis 8” eksikliğinde protein ifadesinin çok azaldığı ya da tamamen kaybolduğu gözlendi. “LPS-responsive beige-like anchor protein” antikoru için ∆MFI, sağlıklı kontrollerde lenfositlerde 36±7.7 olarak gözlenirken, LRBA eksikliğinde lenfositlerde 5.9±1.8 olarak çok düşük düzeyde belirlendi. “SH2D1A/SLAM-associated protein” ve “X-linked inhibitor of apoptosis protein” antikorları ile boyama sonucu sağlıklı kontrollerde ∆MFI değerleri sırasıyla, SAP için CD8+ T hücrelerde 30.2±3 ve XIAP için ise CD3+ T hücrelerde 13.9±3.2, CD20+ B hücrelerde 14.6±3.5 olarak gözlendi.
📌 3 Maddede Bu Makale
Özet
Amaç: Çalışmamız kapsamında, akan hücre ölçer ile tek protokolde “dedicator of cytokinesis 8” (DOCK8), “LPS-responsive beige-like anchor protein” (LRBA), “SH2D1A/SLAM-associated protein” (SAP) ve “X-linked inhibitor of apoptosis protein” (XIAP) hücre içi protein ifadesinin sağlıklı kontrollerde optimizasyonu ve standardizasyonunun sağlanarak hastalarda bu yöntemin tanıda kullanılabilmesinin sağlanması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Heparinli tüplere alınan kanlardan periferik kan mononükleer hücreler izole edildi. Protein ifadeleri, izotipe göre ortalama floresan yoğunluğu farkına (∆MFI ) göre analiz edildi. Bulgular: “Dedicator of cytokinesis 8” antikoru için ∆MFI değerleri, sağlıklı kontrollerde CD3+ T hücrelerde 21.3±4 iken CD20+ T hücrelerde 25±3.3 olarak belirlendi. “Dedicator of cytokinesis 8” eksikliğinde protein ifadesinin çok azaldığı ya da tamamen kaybolduğu gözlendi. “LPS-responsive beige-like anchor protein” antikoru için ∆MFI, sağlıklı kontrollerde lenfositlerde 36±7.7 olarak gözlenirken, LRBA eksikliğinde lenfositlerde 5.9±1.8 olarak çok düşük düzeyde belirlendi. “SH2D1A/SLAM-associated protein” ve “X-linked inhibitor of apoptosis protein” antikorları ile boyama sonucu sağlıklı kontrollerde ∆MFI değerleri sırasıyla, SAP için CD8+ T hücrelerde 30.2±3 ve XIAP için ise CD3+ T hücrelerde 13.9±3.2, CD20+ B hücrelerde 14.6±3.5 olarak gözlendi. Genetik mutasyonu gösterilebilen SAP ve XIAP eksikliği olan hasta olmadığı için kontrolle karşılaştırma yapılamadı. Sonuç: Klinikte şüpheli DOCK8, LRBA eksikliği olgularında hızlı ve güvenilir sonuç vermesi nedeniyle öncelikle protein ifadelerinin akan hücre ölçer cihazında değerlendirilmesi uygundur. Aynı yöntemin SAP ve XIAP eksikliği düşünülen olgularda da kullanılabileceği düşünülmektedir.
Abstract
Objective: The aim of our study was the optimization and standardization of intracellular dedicator of cytokinesis 8 (DOCK8), LPS-responsive beige-like anchor protein (LRBA), SH2D1A/SLAMassociated protein (SAP) and X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) protein expressions in healthy controls with a single flow cytometer protocol and to concomitantly evaluate the possible use of this method for diagnosis. Materials and Methods: Peripheral blood mononuclear cells were isolated from heparinized blood samples. Protein expressions were analyzed as mean fluorescein intensity difference (∆MFI) according to the isotype. Results: ∆MFI values obtained by DOCK8 antibody staining were 21.3±4 in CD3+ T cells and 25±3.3 in CD20+ T cells in healthy controls. These values in patients with DOCK8 deficiency were either very low or completely absent. ∆MFI values obtained by LRBA protein antibody staining were 36±7.7 in healthy controls, while they were at the very low levels of 5.9±1.8 in the LRBA protein deficiency patients. The values obtained by SAP and XIAP antibody staining were 30.2±3 in CD8+ T cells for SAP, 13.9±3.2 in CD3+ T and 14.6±3.5 in CD20+ B cells for XIAP. Since the SAP and XIAP results were not confirmed by gene sequencing, the results were not compared to healthy controls. Conclusion: Due to its rapid and reliable results in clinically relevant cases for DOCK8 and LRBA deficiencies, analysis of protein expression is primarily suitable to evaluate intracellular staining protocol by flow cytometer. In addition, this particular method could be suitable for patients considered to be SAP and XIAP deficient.