Journals / Etlik Veteriner Mikrobiyoloji Dergisi / 1995 / Cilt: 8 - Sayı: 1
The study on cell-associoted vaccine production against to Marek's disease.
- Pages
- 100–126
- DOI
- —
Abstract
The study on cell associated vaccine production against to Marek's disease. In this research; Vaccine production against to MAREK disease had been aimed by the serotype-2 SB-1 and serotype-3 THV, FC-126 Marek cell-associated vaccine strains. Primary chicken embryo fibrablast tissue culture cellsCEF is prepared from SPF eggs fumigated upon receipt at the laboratary and incubated to 10-11 days by the standart method. The CEF is grown in Eagle's minimum essential medium-MEM which is supplemented with 4% sterile new born calf sera, 10% TPB, antibiotics and antimycotic. They are incubated at 37°C in rolling cultura system until the complete manolayer is developed. The complete manolayer is infected with serotype-2 SB-1 or serotype-3 THV, FC- 126 Marek vaccine strains. CEF are incubated about 48 hours until diffuse cytopathic effect-CPE develop. After second passage is done in the same position. When the 15% DMSO-Dimethyl sulphoxide is added as a preservative and they are distributed to ampules. Cells are frozen and stored in -196°C liquid nitrogen. After a sample of the vaccnie is tested for sterility and virus content.
Özet
Bu araştırmada CEF-Chicken Embryo Fibroblast doku kültürü hücrelerinde cell-associated SB-1 ve HTV, FC-126 Marek aşı suşları ile aşı üretilip, kanatlıların bu hastalığına karşı koruyucu olarak kullanılması amaçlanmıştır . CEF hücreleri standart metodla ra göre 10-11 günlük SPF civciv embriyolarından hazırlandı. Hücreler %4 yeni doğmuş buzağı serumu, %10 TPB, antibiyotik ve antimiketik ilaveli MEM mediumda üretildi. Manolayer kültürler 24-48 saat rolling şişelerde in ku be edildi, daha sonra bu 1°CEF hücrelerin ikinci pasajı yapıldı , (2°CEF). Bu pasajın sonunda meydana gelen manolayer kültürlerde SB-1 veya FC-126 Marek aşı suşlarından biri tarafından enfekte edilip hücrelertekrar 1°CEF'te olduğu gibi tamamen sitopatik efekt görülene kadar rolling inkubatörde (yaklaşık 48 saat) inkübe edildi. Virus tarafından CPE-Cytopathic Effect tamamen meydana getirildikten sonra doku kültürü mediumu atılıp , hücreler usulüne uygun olarak toplandı, toplanan hücreler MEM ile %15 oranında hazırlanmış DMSO-Dimethyl sulphoxide içine alınıp sayıldı , her ml' de 2x1 07 hücre olacak şekilde aynı solüsyonla süspansiyon yapılıp ampullere konan aşılar -196°C'de sıvı nitrojen içinde saklanmakta ve sevk edilmektedir. Her üretilen rekoltun sonunda virusun titresi tayin edilir ve sterilite testleride yapılır