AI Summary & Key Takeaways
AI InsightIt is obvious that thispromising method needs further development for clinical applications.
📌 3 Key Takeaways
Abstract
Objective: Thrombocytopenia remains a serious problem in patients treated with highdosechemotherapy and bone marrow transplantation. In recent years, infusion of ex vivoexpanded megakaryocytes (Mk) progenitors into patients has been proposed as a strategyfor shortening the time of platelet engraftment. The development of in vitro culture methodsto obtain sufficient numbers of Mks from haematopoietic stem cells (HSC) is an importanttarget in basic and clinical research projects. The aim of this study was to develop a two-stepex vivo expansion culture system of Mk progenitors from peripheral blood stem cells (PBSC).Methods: PBSC were harvested from three healthy adult donors. CD34+ cells were isolatedand cultured in serum free media supplemented with thrombopoietin (TPO) (50 ng/ml),Interleukin 3 (IL-3) (20 ng/ml) and Interleukin 6 (IL-6) (20 ng/ml) for 12 days followed by anincubation with IL-6 (20 ng/ml) and TPO (50 ng/ml) for another 9 days. The differentiation ofMks was monitored by flow cytometry (% of CD34+/41+ cells). The morphology of the cellswas studied by light, electron and fluorescence microscopy.Results: Morphological analysis of cells generated after 7 days of culture showed typicalaspects of developing Mks. The percentage of CD41+ cells was higher than 70 on day 21.Conclusion: The results obtained in this study demonstrated that this two-step culturesystem is an effective method to obtain high rates of megakaryocytes. It is obvious that thispromising method needs further development for clinical applications.
Özet
Amaç: Yüksek doz kemoterapi veya hematopoietik kök hücre (HKH) transplantasyonusonrası oluşan şiddetli trombositopeni çok ciddi klinik sorunlara yol açmaktadır. Sonzamanlarda, trombositopeni ve benzer durumların tedavisi için ex vivo olarak farklılaştırılmışmegakaryosit-progenitör hücrelerin (MPH) hastalara verilmesi üzerinde yoğun araştırmalaryapılmaktadır. Çeşitli kaynaklardan elde edilen HKH'lerin MPH ve megakaryositlerefarklılaştırılmasıyla ilgili yeni tekniklerin geliştirilmesi temel ve klinik çalışmalarbakımından büyük bir önem taşımaktadır. Bu çalışmada, periferik kandan izole edilenHKH'lerin ex vivo iki aşamalı likit kültür yöntemiyle megakaryosite kadar farklılaştırılmasıamaçlanmıştır.Yöntem: Sağlıklı 3 donörden izole edilen mononüklear hücrelerden CD34+ HKH'ler eldeedildi. Kök hücreler, önce 12 gün boyunca trombopoietin (TPO) (50 ng/ml), interlökin-3 (IL-3) (20 ng/ml) ve interlökin 6 (IL-6) (20 ng/ml) içeren serumsuz medyumda, daha sonra 9gün boyunca IL-6 (20 ng/ml) ve TPO (50 ng/ml) içeren serumsuz medyumda inkübe edildi.Megakaryositlerin farklılaşması, % CD34/41 oranlarına bakılarak akım sitometrik yöntemleizlendi. Hücrelerin morfolojik incelemeleri ise ışık, elektron ve floresans mikroskopla yapıldı.Bulgular: Morfolojik değerlendirmeler sonucunda kültürün 7. gününden itibarenmegakaryositlerin oluşmaya başladığı; kültürün 21. gününde oluşan megakaryosit oranınınise >%70 olduğu saptandı.Sonuç: Elde edilen sonuçlar, uygulanan iki aşamalı hücre kültür yönteminin megakaryositleriyüksek oranda elde etmede etkin bir yöntem olabileceğini ortaya koymaktadır. Bununlabirlikte, ümit vadeden bu metodun klinik uygulamalar açısından geliştirilmesi gerekmektedir.