MTUS1 TÜMÖR BASKILAYICI GEN VE ONUN ANA TRANSKRİPT VARYANTI ATIP3A’NIN U2OS VE MCF- 7 HÜCRELERİNDE PAKLİTAKSEL KAYNAKLI NEGATİF REGÜLASYONU

Paclitaxel-induced Negative Regulation of MTUS1 Tumor Suppressor Gene and its Major Transcript Variant ATIP3a in U2OS and MCF-7 Cells

Özet

Artan kanıtlar, MTUS1’in meme, yumurtalık, pankreas, kolon kanseri gibi çeşitli malignitelerde düşük seviyelerde eksprese edildiğini göstermiştir. Ayrıca, fonksiyonel çalışmalar, ATIP1 ve ATIP3a/b’nin, tümör baskılayıcı aktivitelere sahip olan MTUS1’in iki büyük splice varyantı olduğunu göstermektedir. ATIP3’ün bir mikrotübül ilişkili protein bölgesine sahip olduğu, mikrotübüllerle birlikte lokalize olduğu ve mikrotübül dinamiğinin düzenlenmesinde rol alarak uzamış mitoza yol açtığı rapor edilmiştir. Buna ek olarak, paklitaksel, çeşitli kanser tiplerinde güçlü etki gösteren ve mikrotübüllerin oluşumunu indükleyen ve bozulmasını engelleyen güçlü bir antineoplastik ajantır. Dolayısıyla, bu çalışmada tümör baskılayıcı MTUS1 ve MTUS1’in majör transkript varyantı olan ATIP3’ün paklitaksel ile indüklenmiş mikrotübül stabilizasyonu ve hücre ölümündeki rolününün araştırılması amaçlanmıştır. Paklitakselin aktif dozunu saptamak için, MCF-7 ve U2OS hücrelerinin hücre canlılığı, MTT hücre canlılığı testi kullanılarak belirlenmiştir. Ayrıca, toplam MTUS1 mRNA ve ATIP3 mRNA’nın gen ekspresyonundaki değişiklikler, real-time PCR metodolojisi kullanılarak belirlenmiştir. Sonuç olarak, MTUS1 ve ATIP3 ekspresyonun, MCF- 7 hücrelerinde paklitaksel uygulaması sonrasında azaldığı tespit edilmiştir. MTUS1’in ekspresyon seviyeleri U2OS hücrelerinde de azalmıştır, ancak ATIP3’ün seviyesi artmıştır. Ancak, bu değişiklikler istatistiksel olarak önemsiz bulunmuştur. Sonuç olarak, paklitaksel U2OS ve MCF-7 kanser hücrelerinde MTUS1 tümör baskılayıcı geni ve MTUS1’in majör transkript varyantı olan ATIP3’ü negatif yönde düzenlemektedir. Bu sonuçlar MTUS1 ve protein ürünü olan ATIP3’ün mikrotübül dinamiğinin düzenlenmesinde rol oynayabileceğini göstermiştir.

Abstract

Accumulating evidence proposes that MTUS1 was expressed at low levels in a variety ofmalignancies such as breast, ovarian, pancreas, colon cancers. Also, functional studies indicatethat ATIP1 and ATIP3a/b are the two major splice variants of MTUS1 which possess tumorsuppressor activities. ATIP3 was shown to bear a microtubule-associated domain and is localizedin association with microtubules and interfere with the microtubule dynamics and leads toprolonged mitosis. In addition, paclitaxel is a talented antineoplastic agent which shows potentactivity on various types of cancers and induces the assembly of microtubules and inhibits theirdisassembly. Accordingly, in this study, we aimed to examine the key role of tumor suppressorMTUS1 and its major transcript variant ATIP3 in paclitaxel-induced microtubule stabilization andcell death. To determine active dose of paclitaxel, cell viability of MCF-7 and U2OS cells wasdetermined by using MTT cell viability assay. Also, gene expression changes of total MTUS1 andATIP3 mRNAs were determined by using real-time PCR methodology. As a result, the expressionof MTUS1 and ATIP3 was lowered in response to paclitaxel in MCF-7 cells. Expression levelsof MTUS1 were also reduced in U2OS cells but ATIP3 was increased. However, these changeswere statistically insignificant. In conclusion, paclitaxel is inducing negative regulation of MTUS1tumor suppressor gene and its major transcript variant ATIP3a in U2OS and MCF-7 cells and theymight be involved in the regulation of microtubule dynamics