Dergiler / Türkiye Parazitoloji Dergisi / 2018 / Cilt: 42 - Sayı: 4
Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması
- Sayfa
- 240–244
- DOI
- —
Özet
Amaç: Bu çalışmada in vitro şekillenen hücre dışı tuzak yapılarının omurgasını oluşturan DNA’nın kantitatif ölçümünde iki ekstrasellüler DNA boyasının(Sytox orange ve Picogreen) etkinliğinin karşılaştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla koyun polimorf nükleer lökosit (PMN)-Toxoplasma gondii takizoitkültürü model olarak alınmıştır.Yöntemler: Çalışma kapsamında koyunlardan izole edilen PMN ve T. gondii takizoitleri farklı sürelerde (30, 60, 90 ve 120 dakika) inkübe edilmiş vereaksiyon sonucunda açığa çıkan ekstrasellüler DNA iki farklı boya ile boyanarak ölçülmüştür.Bulgular: Çalışma sonucunda 30 dakikalık inkubasyon dışındaki (p=0,014) inkubasyon sürelerinde açığa çıkan DNA’nın ölçümü bakımından iki boyaarasında istatistiksel fark bulunmamıştır (p>0,05).Sonuç: İki boya arasında 30. dakikadaki boyanma farklılığı önemli bulunmuştur. Bu durumun sebebinin kullanılan boyaya ait boyama özelliği ile ilgiliolabileceği düşünülmüştür. In vitro netosis çalışan araştırıcıların kısa süreli inkubasyon sonucunda şekillenen ekstrasellüler DNA’nın kantitatif analizindeiki farklı boya kullanmaları önerilmiştir.
Abstract
Objective: The present study aimed to compare the effectiveness of two extracellular DNA dyes (Sytox Orange and PicoGreen) in quantitative measurement of the DNA that forms the backbone of the extracellular trap structures in vitro. Toward this aim, the co-culture of polymorphonuclear leucocytes (PMNs) and Toxoplasma gondii tachyzoites isolated from sheep was selected as model. Methods: T. gondii tachyzoites and PMNs isolated from the sheep were incubated for varied durations (30, 60, 90 and 120 min); the extracellular DNA released following this incubation was stained using two different dyes. Results: In the present study, no statistical significant difference was observed between the two extracellular DNA dyes with regard to the measurement of extracellular DNA released for all the incubation durations (p>0.05), except for the 30-min incubation (p=0.014). Conclusion: There was a statistically significant difference at 30 min incubation time. This difference may be attributed to the staining properties of the dye. Researchers studying in vitro netosis are recommended to use two different extracellular DNA dyes for the quantitative analysis of extracellular DNA formed during short-term incubation.