Dergiler / Türkiye Parazitoloji Dergisi / 2018 / Cilt: 42 - Sayı: 4
Farklı Sıvı Besiyerlerinde Trypanosoma cruzi’nin Üreme Yoğunluklarının Karşılaştırılması ve Kriyoprezervasyonu
- Sayfa
- 249–253
- DOI
- —
Özet
Amaç: Bu çalışmada Trypanosoma cruzi (T. cruzi) suşunun gerek kültürde canlılık süresi gerekse üreme hızı bakımından en iyi sıvı besiyeri ortamını tespitetmek ve çalışılan suşun kriyoprezervasyonunu sağlamak amaçlanmıştır.Yöntemler: T. cruzi suşu ticari olarak satın alınan RPMI 1640, Medium 199 (M199), Schneider’s İnsect Medium (SİM), Nutrient Broth (NB), Brain Heartİnfusion Broth (BHİB) olmak üzere beş faklı sıvı kültür ortamında üreme yoğunlukları bakımından değerlendirildi. Parazit kültürleri gün aşırı olarak 24gün boyunca takip edildi. T. cruzi suşunun kriyoprezervasyonu da yapılarak altı ay sonra canlılık durumu test edildi.Bulgular: T. cruzi epimastigotlarının NB ve BHİB besiyerlerinde üremediği tespit edildi. İlk 10 günlük veriler incelendiğinde RPMI 1640, M199, SİMbesiyerlerinde üreme potansiyeli açısından önemli bir fark gözlenmedi. RPMI 1640 besiyeri 12 ile 24’üncü günler arasında en iyi üremenin görüldüğübesiyeri oldu. Parazitin 18’inci gün itibariyle form değiştirerek amastigot forma dönüştüğü, 24’üncü günde amastigot yoğunluğunun en üstseviyeye ulaşarak üremenin durduğu tespit edildi. T. cruzi suşunun kriyoprezervasyonu sonucunda altı ay sonra T. cruzi suşunun canlılığını koruduğutespit edildi.Sonuç: T. cruzi suşunun epimastigot formu ile planlanan araştırmalarda öncelikle RPMI 1640 besiyerinin daha sonra M199 ve SİM besiyerlerinin tercihedilmesinin uygun olacağı kanısına varılmıştır. Epimastigot formu ile yapılacak çalışmalar için çalışma planının 18. güne kadar, amastigot formu ile yapılacakçalışmalarda ise planlamanın 18. günden sonra yapılmasının uygun olacağı düşünülmüştür. Ayrıca T. cruzi suşunun epimastigot formunun %15DMSO yoğunluğunda sıvı azot tankında kriyoprezervasyon yapılarak uzun süre saklanabileceği kanısına varılmıştır.
Abstract
Objective: This study aims to determine the optimum liquid medium for the reproduction of Trypanosoma cruzi strains and provide cryopreservation. Methods: The reproduction density of T. cruzi strain was evaluated in the following five different commercial liquid culture media: RPMI 1640, Medium 199 (M199), Schneider’s İnsect Medium (SİM), Nutrient Broth (NB), Brain Heart İnfusion Broth (BHİB). Cultures were monitored on every other day for a period of 24 days. Cryopreservation of T. cruzi was also performed and viability was tested after six months. Results: Epimastigotes of T. cruzi were not found to be produced in NB and BHIB media. Significant difference was not observed among the reproduction potential of RPMI-1640, M199, and SIM after evaluating the data for the first 10 days. Between days 12 and 24, RPMI-1640 was found to be the best reproduction medium. From the 18th day onwards, parasites transformed amastigotes. On the 24th day, the highest level of amastigote amount was observed, and reproduction was determined to have stopped. As a result of cryopreservation, it was determined that the survival of T.cruzi continued after six months.. Conclusion: Thus, the selection of RPMI-1640 medium, followed by M199 and SIM media would be appropriate when studying T. cruzi epimastigotes. Studies using epimastigotes should be planned for up to 18 days and for those using amastigotes, it would be appropriate to plan the studies after the 18th day. Moreover, T. cruzi can be cryopreserved with 15% DMSO and stored for a long time in liquid nitrogen.