İnsan servikal karsinoma hücre dizisinde nitrik oksit ile yönlendirilen hücre ölümü üzerinde hidrojen peroksidin etkisi

Effects of hydrogen peroxide on nitric oxide mediated cellular death in human cervical carcinoma cell line

Özet

Amaç: Nitrik oksit (NO) ve reaktif oksijen türleri (ROT) gibi organ mikroçevre faktörleri veonların apoptoz ile etkileşimleri, normal hücrelerin ve kanser hücrelerinin davranışlarınıetkileyebilir . Bu olasılık sağaltım stratejileri için yeni hedefler sağlayabilir . NO'nın tümörhücresinin yaşamını sürdürmesi, redoks homeostazı; tümör hücrelerinin genetik ve epigenetikyapılanması gibi olaylarda rolü bulunmaktadır . Bu çalışmada NO'nın yönlendirdiği hücreölümünde ROT'un [Hidrojen peroksit (H O ) ile taklit edilmiştir] etkileri araştırılmıştır . 2 2 Yöntem: İnsan servikal karsinoma hücre dizisi (HeLa); Dulbecco's Minimum Essential Medium(DMEM) ile üretilmiştir . Hücrenin yaşamı ve proliferasyonları, niceleyici koloritmetrik bir 3 (4,5dimetiltiyazol- 2 il)-2,5- difenil tetrazolyum bromid (MTT) deneyi ile taranmıştır . DNA'yabağlanan boya Hoechst 33342 (HOE 33342) ve propidyum iyodid (PI), nükleer morfoloji vemembran bütünlüğünün kantifikasyonu ve mikroskopik identifikasyonu için ayırt edici boyaçalışması olarak kullanılmıştır .Bulgular: HeLa hücreleri yalnızca L-arjinin (NO uyarıcısı) ile uyarıldığında (NO grubu) % 66± 9.2 hücre ölmüş ve ölen bu hücrelerin % 51±7.3'ü “apoptotik yolak”tan geçerek olmuştur . NO,H O varlığında (peroksi nitrit grubu) uyarıldığında daha fazla hücre ölmüş (% 98.3±1.7) ve bu 2 2 ölümler “nekrotik yolak”tan geçerek olmuştur (% 69.3±5.7). Hücreler H Oile uyarıldığında 2 2 (peroksit grubu) bütün hücreler ölmüş (% 99.3±4.1) ve hücresel ölüm “nekrotik yolak” üzerindenolmuştur (% 85±6.9).Sonuç: HeLa hücrelerinde L-arjinin (L-arg) ve H O 'nin hücresel ölümü belirgin olarak, fakat 2 2 farklı yolaklardan giderek arttırdıkları görülmüştür . Ancak birlikte kullanıldıklarında, H O 'nin, L- 2 2 arg'in yarattığı hücresel ölümü “apoptotik yolak”tan, “nekrotik yolak”a çevirdiğigözlemlenmiştir .

Abstract

Objective: Organ microenvironment factors such as nitric oxide (NO) and reactive oxygenpecies (ROS), and their interactions with apoptosis may influence the behavior of normal andcancer cells. This possibility may provide new targets for therapy strategies. The effect of NO onumor cell survival is influenced by multiple factors, including the levels of redox homeostasis,and genetic and epigenetic make up of tumor cells. The effects of ROS [mimicked by hydrogenperoxide(H O )] on NO-mediated cellular death were examined in this study. 2 2 Method: Human cervical carcinoma cell line (HeLa) was grown using Dulbecco's MinimumEssential Medium (DMEM). Cell survival and proliferations were determined by a quantitativecolorimetric MTT assay. The DNA binding dye Hoechst 33342 and propidium iodide (HOE/PI) were Results: Conclusion: used together in a differential dye uptake assay for microscopic identification and quantification of membrane integrity andnuclear morphology.Results: When HeLa cells were induced by L-arginine (NO inducer) alone (nitric oxide group), 66 + 9,2 % of cells died, andof these cells 51 + 7,3 % died through an “apoptotic pathway”. We found that when NO was induced in the presence of H O2 2 (peroxynitrite group), more cells died (98, 3 + 1, 7 %) through a “necrotic pathway” (69, 3 + 5, 7 %). When cells were induced byhydrogen peroxide (peroxide group) all cells died (99, 3 + 4, 1 %) and cellular death was through a “necrotic pathway” (85 + 6, 9%).Conclusion: In HeLa cells L-arginine (L-arg) and H O significantly increased cellular death but in distinct pathways. But 2 2 when treated together the presence of H Oshifted cellular death caused by L-arg from apoptotic pathway to necrotic 2 2 pathway.