Dergiler / Türk Biyokimya Dergisi / 2013 / Cilt: 38 - Sayı: 3
Improved Performance of Pseudomonas fluorescens lipase by covalent immobilization onto Amberzyme
- Sayfa
- 313–318
- DOI
- —
Özet
Amaç: Bu çalışmada, yüksek aktivite verimi elde etmek için Pseudomonas fluorescens lipazınoksiran grubu ile aktif bir destek olan Amberzyme üzerine kovalent immobilizasyonununkoşulları optimize edildi ve immobilize lipazın kullanım ve saklama kararlılıkları test edildi.Yöntem: İmmobilizasyon için optimum şartlar ayrı ayrı değiştirilerek belirlendi (pH 5-9arası; tampon derişimi 0.025-2.5 M arası; Amberzyme miktarı 100-500 mg arası ve immobilizasyonsüresi 24-120 saat arası). Protein miktarları ve enzim aktivitesi UV-visible spektrofotometresi(PYE UNICAM SP8-200 UV/Vis spectrophotometer) kullanılarak tayin edildi.Bulgular: İmmobilizasyon koşulları (tampon pH'sı ve molar derişimi, enzim/destek oranıve immobilizasyon süresi) immobilizasyon etkinliğini önemli ölçüde etkilemiştir. İmmobilizasyonkoşullarının optimizasyonu sonucu % 100 immobilizasyon verimi ve % 145 aktiviteverimi elde edilmiştir. İmmobilize lipazın kullanım ve saklama kararlılığı da test edilmiştir.İmmobilize lipaz, aktivitesini birbirini takip eden yirmi kullanım boyunca korumuştur. Ayrıcaimmobilize lipaz yüksek bir saklama kararlığı göstermiş ve 20 gün boyunca aktivitesindeherhangi bir azalma olmadığı gözlenmiştir.Sonuç: Bu çalışmada elde ettiğimiz sonuçlar, Pseudomonas fluorescens lipazın kovalentimmobilizasyonu ile ilgili literatürdeki en iyi sonuçlardır. Dolayısıyla bizim gelecekteki çalışmalarımızbu immobilize Pseudomonas fluorescens lipazın biyodizel üretimi, yağlarınhidrolizi ve önemli esterifikasyon reaksiyonlarında kullanımı üzerinde yoğunlaşacaktır.
Abstract
Objective: In this study, the conditions of covalent immobilization of Pseudomonasfluorescens lipase onto an oxirane-activated support (Amberzyme) were optimized to obtaina high activity yield. Furthermore, the operational and storage stabilities of immobilizedlipase were tested.Methods: Optimum conditions for immobilization were determined by changing individuallythe conditions (pH from 5 to 9; buffer concentration from 0.025 to 2.5 M; amount ofAmberzyme from 100 to 500 mg and duration of immobilization from 24 to 120 h). Amountsof protein and the activity of enzyme were determined by UV/Vis (PYE UNICAM SP8-200UV/Vis spectrophotometer).Results: Immobilization conditions (pH and molar concentration of immobilization buffer,enzyme/support ratio and immobilization duration) significantly affected the immobilizationefficiency. 100% immobilization yield and 145% activity yield were achieved by optimizingthe immobilization conditions. Operational and storage stabilities of immobilized lipasewere determined as well. The immobilized enzymes retained its activity for 20 consecutivebatch reactions. Furthermore, the immobilized lipase showed a high storage stability as nodecrease in its activity was observed for 20 days.Conclusion: Our results obtained in the present study are the best in the covalentimmobilization of Pseudomonas fluorescens lipase in the literature. Therefore our futurestudies will focus on using the immobilized Pseudomonas fluorescens lipase for theproduction of biodiesel, hydrolysis of oils and various important esterification reactions.