Geniş yapılı Yorkshire domuz ırkına ait fibroblast hattının kurulması ve biyolojik karakterizasyonu

Establishment and Biological characterization of a Large Yorkshire Pig fibroblast line

Özet

Amaç: Çalışmada geniş yapılı Yorkshire domuzlarından somatik hücre formunda fibroblast hücre bankasının kurulması, biyolojik karakterizasyonu, uzun dönem saklanması ve genetik kaynak olarak sürdürülebilirliği araştırılmıştır. Gereç ve Yöntem: Fibroblast hücre hattının kurulmasında kulak kenar dokusu doğrudan kültürü yapılarak kullanılmış, dondurularak saklanma yöntemleri ve hücre hattının kalitesi değerlendirilmiştir.Bulgular: Biyolojik analizler hücrelerin morfolojik olarak homojen fibroblastlar olduğunu göstermektedir. Populasyonun tahmini ikiye katlanma süresi (PDT) 72 saat olarak bulunmuştur. Büyüme eğrisi latent faz, logaritmik faz ve plato fazını kapsayan "S" şeklindedir. Bakteri, mantar, virus ve Myoplasma testleri negatiftir. Laktat dehidrogenaz (LDH) ve malat dehidrogenaz (MDH) analizleri hücre hatları arasındaki kontaminasyon olasılığını ortadan kaldırmaktadır. Karyotipleme G-bantlama, toplam kromozom sayısının 2n = 36 olduğunu, populasyondaki diploid hücre oranının % 91-96 olduğunu göstermektedir. pEGFP-N3, pEYFP-N1 ve pDsRed1-N1'nin transfeksiyon verimleri % 5.14 ile % 12.13 arasında değişmektedir. Hücre bankasının biyobelirteçleri Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC)'nun bütün standartlarını karşılamaktadır.Sonuç: Çalışma sadece geniş yapılı Yorkshire domuzlarının üreme hücrelerinin hücresel düzeyde etkili bir biçimde saklanmasını göstermesi bakımından değil, aynı zamanda hücre biyolojisi, tıp, genomiks, post-genomiks, genetic mühendislik ve embriyo mühendisliği gibi alanlar için deneysel kaynak sağlaması bakımından önemlidir.

Abstract

Aim: This study aimed to establish the fibroblast cell bank of the Large Yorkshire pig in the form of somatic cells, and to study its biological characteristics, to explore long-term conservation and sustainable use of this genetic resource.Material and methods: Ear marginal tissue of the Large Yorkshire pig was used to establish a fibroblast cell line by direct culture of explants and cryopreservation techniques, and the quality of the cell line was assessed.Results: Biological analyses showed that the cells were morphologically homogenous fibroblasts, and the estimated population doubling time (PDT) was 72 hours. The growth curve appeared as a typical "S" shape as the cell growth passed through a latent phase, a logarithmic phase and a plateau phase. Tests for bacteria, fungi, viruses and Mycoplasma were negative. Analysis of lactate dehydrogenase (LDH) and malate dehydrogenase (MDH) isoenzymes ruled out cross-contamination between cell lines. Karyotyping and G-banding indicated a total chromosome number of 2n = 36; the proportion of diploid cells in the population was 91-96%. The transfection efficiencies of pEGFP-N3, pEYFP-N1 and pDsRed1-N1 were between 5.14 and 12.13%. Bioindicators of the cell bank met all the standards of the American Type Culture Collection (ATCC).Conclusion: This study not only shows the effective preservation of the Large Yorkshire pig germplasm at the cellular level, but also provides a valuable experimental resource for fields including cell biology, medicine, genomics, post-genomics, genetic engineering and embryo engineering.