İnsan kolorektal adenokarsinom hücrelerindeki Ca2+ sinyal iletimi üzerine ekonazolün etkisi

Effect of econazole on Ca2+ signaling in human colorectal İY adenocarcinoma cells

Özet

Giriş: Geniş kullanım alanına sahip, antifungal etkili Ekonazol bir azol bileşiğidir ve şimdilerde farklı terapotik etkileri çalışılmaktadır. Son zamanlarda ekonazolün antitümoral etkileri hem in vivo hem de hücresel düzeyin de gösterilmiştir. Bununla birlikte, etki mekanizması halen kesin belli değildir.Amaç: Çalışmanın amacı İnsan adenokarsinom hücre kültürlerinde Ekonazolün hücre içi Ca2+ sinyal iletimi yollarındaki etkisinin belirlenmesidir.Metot: Ca2+ konsantrasyonu Fura 2-yüklenmiş HT29 hücrelerinde floresan işaretlemeyle ölçülmüştür. Cary Eclipse spektrofotometre (Varian Ltd., Madrid, Spain) kullanılarak, 1 ml'lik karıştırılmış HT29 hücrelerinde, 340 ve 380 nm eksitasyon dalga boylarında ve 510 nm emisyonda fluoresans ölçülmüştür. Bulgular: Ekonazolün Ca2+ homeostazı üzerine dual etkisi olduğu gösterilmiştir. Bu etki doza bağımlı Ca2+ konsatrasyonundaki artış sonucunda görülmüştür. Hem Tapsigargin-duyarlı depolardan hem de hücredışından Ca2+ girişi etkiye katkıda bulunmuştur. Fosfolipaz C-bağımlı bir yolağın ekonazol tarafından aktive edildiği ispatlanmıştır. Ek olarak, ekonazolün Ca2+'un depolanmak üzere fizyolojik aktivasyonunu yüksek oranda inhibe ettiği gösterilmiştir.Sonuç: Bu çalışma, Ekonazolün insan adenokarsinom HT29 hücre kültürlerinin fizyolojisini çeşitli moleküler mekanizmalarla etkilediğini göstermiştir

Abstract

Introduction: Econazole, an azole compound widely used as an antifungal drug, is currently investigated for additional therapeutic effects. In fact, the antitumoral properties of econazole have been recently demonstrated, both in vivo and at the cellular level. However, the precise mechanism of action behind its effects is still unclear. Aim: To examine the effect of econazole on intracellular Ca2+ signaling pathways in a human adenocarcinoma cell line. Methods: [Ca2+]i was measured in Fura 2-loaded HT29 cells by fluorescence. Fluorescence was recorded from 1ml aliquots of magnetically stirred HT29 cells using a Cary Eclipse Spectrophotometer (Varian Ltd., Madrid, Spain) with excitation wavelengths of 340 and 380 nm and emission at 510 nm. Results: We have demonstrated that econazole has a dual effect on Ca2+ homeostasis. It caused a dose-dependent increase in [Ca2+]i. Both mobilization from thapsigargin-sensitive stores and extracellular Ca2+ influx contributed to the effect. A phospholipase C-dependent pathway proved to be activated by econazole. In addition, econazole greatly inhibited a physiological activation of store-operated Ca2+ entry. Conclusion: This study provides further molecular mechanism of econazole suggesting that this drug may modify the physiology of human adenocarcinoma HT29 cell line