Dergiler / Türk Biyokimya Dergisi / 2018 / Cilt: 43 - Sayı: 2
Yara yaşı tahmininde apoptotik kaspaz düzeylerinin değerlendirilmesi
- Sayfa
- 126–133
- DOI
- —
Özet
Amaç: Sıçan derisindeki cilt yara yaşı tahmininde, apoptotik sinyal yolağı genlerinin ifadelenmesinin potansiyel kullanımını araştırmayı amaçladık. Gereç ve Yöntem: Bu amaçla, deneysel modelde bir neşter kullanarak kesici alet yaralanmaları oluşturduk. Daha sonra sıçan cilt yaralarında kantitatif gerçek zamanlı PCR ile Caspase 3, 8 ve 9 mRNA düzeylerini ve immünohistokimya yöntemi ile protein düzeylerini değerlendirdik. Buna ilaveten, apoptotik hücreleri saptamak için TUNEL yöntemini kullandık. Bulgular: Kaspaz 3 mRNA düzeyinin 3. günde (p < 0.05) belirgin olarak arttığı (2.1 ± 0.4 kat) ve Kaspaz 8 mRNA düzeyinin 5. günde (p < 0.05) belirgin olarak arttığı (1.8 ± 0.2 kat) gözlendi. Kaspaz 9 mRNA düzeyi 3. günde (1.9 ± 0.1 kat) arttı ve 5. günde (2.5 ± 0.4 kat) arttı (p < 0.05). Polimorfonükleer lökositlerin (PMNL) ve inflamatuar mononükleer hücrelerin (IMC) yüzde değerleri Kaspaz 3, 8, 9 antikorları ile immünhistokimyasal boyama sonrasında gözlendi. İmmünohistokimya sonuçlarımızın gözlenen mRNA sonuçları ile tutarlı olduğu bulundu. İmmünohistokimyasal boyamadan sonra 3. ve 5. günlerde Kaspaz 3, 8 ve 9 pozitif hücrelerde istatistiksel olarak anlamlı bir artış olduğunu belirledik. Sonuç: Bulgularımız, apoptotik faktörlerin zamana bağlı özelliklerinin yara yaşını tahmin etmede potansiyel bir araç olabileceğini düşündürmektedir.
Abstract
Objectives: We aimed to investigate the potential use ofthe expression of apoptotic signaling pathway genes of ratin skin wound age estimation.Material and methods: For this purpose, we formed cuttingtool injuries using a scalpel in an experimental model.Then, we assessed Caspase 3, 8 and 9 mRNA levels by usingquantitative real-time PCR and protein levels by usingimmunohistochemistry in rat skin wounds. In addition, weused TUNEL assay to detect apoptotic cells.Results: We observed that Caspase 3 mRNA level significantlyincreased (2.1 ± 0.4 folds) on day 3 (p < 0.05) andCaspase 8 mRNA level significantly increased (1.8 ± 0.2folds) on day 5 (p < 0.05). Caspase 9 mRNA level increased(1.9 ± 0.1 folds) on day 3 and (2.5 ± 0.4 folds) on day 5(p < 0.05). The percentage values of polymorphonuclearleukocytes (PMNLs) and inflammatory mononuclear cells(IMCs) were observed after immunohistochemical stainingby Caspase 3, 8, 9 antibodies. Our immunohistochemistryresults were found to be consistent with the mRNAresults observed. We reported a statistically significantincrease in Caspase 3, 8 and 9-positive cells on days 3 and5 after immunohistochemical staining as well.Conclusion: Our results suggest that time-dependent featuresof apoptotic factors might offer a potential tool inestimating wound age.