Dergiler / Türk Biyokimya Dergisi / 2018 / Cilt: 43 - Sayı: 6
Alternaria alternata’dan mantar lakkazı üretiminin optimizasyonu, saflaştırılması ve moleküler karakterizasyonu
- Sayfa
- 613–622
- DOI
- —
Özet
Amaç: Endüstriyel atıklar ve tarımsal biyokütle Pakistan gibi gelişmekte olan ülkelerde çevresel tehlikelerin başında gelmektedir. Lakkazlar, çeşitli endüstriyel uygulamalarla birlikte, bu tür tehlikeli bileşiklerin oksitlenmesinde rol almakta ve detoksifikasyonda kullanılmaktadır. Materyal ve metod: Bu çalışmada bol miktarda bulunan sarkanda çimi “Saccharum spontaneum”, Alternaria alternata’dan lakkaz üretimi sırasında agro-atık madde olarak kullanıldı. Günümüzde sadece beyaz çürükçül mantarları lakkaz üretimi için kullanılmaktadır, Alternaria alternata tarafından lakkaz üretimi üzerine neredeyse hiç çalışma yapılmamıştır. Bu araştırma çalışmasında, katı hal fermantasyonu (SSF) ile maksimum lakkaz üretimi için farklı fiziksel ve kimyasal parametreler optimize edilmiştir. Bulgular: Enzim saflaştırıldı ve molekül ağırlığı SDS-PAGE ile belirlendi. Maksimum lakkaz aktivitesi (21.87 ± 0.0115 birim/mL), pH 5 ve 35°C’de inkübasyonun 7. gününde tespit edildi. Eklenen metal iyonlarından hiçbiri lakkaz üretimini arttırmadı. Galaktoz ve “maya özütü” en yüksek lakkaz üretimi için optimum karbon ve azot kaynağı olarak kullanılır. Sonuç: SDS-PAGE sonrasında yaklaşık 51 kDa molekül ağırlığına sahip monomerik bir protein (Lakkaz) elde edildi.
Abstract
Objective: Industrial effluents and agriculture biomassare main environmental hazards which are facing bydeveloping country like Pakistan. Along with variousother industrial applications, laccases are also involved inthe oxidation of various industrial hazardous compoundsto detoxify them. This study was designed to produce andpurify laccase from ascomyceteous fungi, i.e. Alternariaalternata through solid stat fermentation.Materials and methods: Abundantly available Sarkandagrass “Saccharum spontaneum” was used as agro-waste substratefor laccase production from fungus A. alternata. Previouslyonly white rot fungi are familiar for laccase productionand almost no work has been done on laccase productionby A. alternata. In this research work, different physical andchemical parameters were optimized for maximum laccaseproduction through solid state fermentation (SSF).Results: Enzyme was purified and its molecular weightwas determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis (SDS-PAGE). Maximum laccaseactivity (21.87 ± 0.0115 unit/mL) was detected on 7th day ofincubation having pH 5 of the medium at 35°C. None of theadded metal ions increased laccase production. Galactoseand “yeast extract” used as optimum carbon and nitrogensource for highest laccase production.Conclusion: A monomeric protein (laccase) having approximately51 kDa molecular weight obtained after SDS-PAGE.