Deneysel sepsis modelinde siklosporin-A'nın akciğer ve ileum dokusunda apoptozis ve nükleer faktör-kappaB ekspresyonuna etkileri

Effects of cyclosporin-A and NF-kB expression in illeum and lung tissue in a CLP-induced experimental sepsis model

Özet

Amaç: Çalışmamızda Siklosporin A'nın (CsA); Çekal ligasyon ve delme (CLP) ile deneysel sepsis modelinde ve akciğer dokularında reaktif oksijen ve nitrojen türevleri aracılı sitotoksisitede, doku apoptozisinde ve nükleer faktor-kappa B (NF-kB) ekspresyonundaki olası etkileri değerlendirildi.Gereç ve Yöntem: Fakülte etik kurul onayı alındıktan sonra 220-250 gr. ağırlıklarında 60 erkek Wistar rat rasgele 4 eşit gruba ayrıldı; I-Kontrol grubu (n=15), II-CLP grubu (n=15), III-CsA uygulanan kontrol grubu (n=15), IV-CLP + CsA uygulanan grup (n=15). III. ve IV. gruptaki ratlara; laparotomi işleminden sonra 6. ve 24. saatlerde 10 mg kg-1 dozda Siklosporin-A (CsA) intraperitoneal olarak verildi. 36. saatte tüm ratlardan akciğer ve ileum doku örnekleri alındı. Doku örneklerinde malondialdehit (MDA) ve 3-L nitrotirozin (3-NT) düzeyleri ölçüldü, agaroz-jel elektroforez yöntemiyle "DNA laddering" çalışıldı. Doku histopatolojisi hematoksilen-eozin boyama ile nükleer faktor-kappa B ekspresyonu ise immunhistokimyasal boyama ile değerlendirildi.Bulgular: CLP grubunda ileum dokusunda ölçülen 3-NT değerleri belirgin arttı. CLP+CsA grubunda ise bu artışın önlendiği saptandı. Doku MDA düzeylerinde; gerek ileum gerekse akciğer dokularında gruplar arasında anlamlı bir farklılık izlenmedi (p=0.119). Histopatolojik değerlendirmede; CLP grubunda morfolojik hasarlanma bulgularının görülmesine ragmen, CLP+CsA grubunda ise bu değişiklikler daha azdı. ‹leum dokusunda Siklosporin-A tedavisiyle agaroz-jel elektroforez yöntemiyle ölçülen DNA kırılmalarının % 25 oranında önlendiği izlendi. NF-kB ekspresyonunda ileum ve akciğer dokusunda gruplar arasında immunohistokimyasal olarak bir farklılık izlenmedi.Sonuç: Sonuçlarımız sepsis modelinde Siklosporin-A'nın ileum ve akciğer dokusunda hasarlanmayı önlediği yönündedir. Bu bulgular Siklosporin-A'nın ‹leum dokusunda peroksinitrit kökenli hasarlanmayı önlerken apoptozisi de baskıladığını göstermektedir. Sepsis tedavisinde, Siklosporin-A'nın hücresel düzeyde etkin olduğu düşünüyoruz.

Abstract

Aim: We investigated the effects of Cyclosporin-A (CsA) on reactive oxygen and nitrogen species, apoptosis and expression of NF-kB in ileum and lung tissues in a cecal ligation and puncture (CLP) induced experimental sepsis.Material and Method: After ethics committee approval, 60 male Wistar rats (200-250 gr) were randomized to four groups: Group I; control group (sham) (n=15), Group II; CLP group (n=15), Group III; sham+CsA (n=15), Group IV; CLP+CsA group (n=15). Groups III and IV received intraperitoneal CsA (10 mg kg-1) 6 and 24 hours following surgery. 36 hours later specimens of ileum and lung were excised.Malondialdehid (MDA) and 3-l nitrotyrosine (3-NT) were measured biochemically and "DNA laddering" was evaluated by agarose-gel electrophoresis. Histopathology was performed with hemotoxilen-eosine staining and NF-kB expression was assessed immunohistochemically.Results: CLP-induced sepsis significantly increased ileal tissue 3-NT levels p=