İnsan Servikal Kanser Hücrelerinde Piknogenol®’ün Sisplatin ile Etkileşmesi Üzerine İn Vitro Çalışma

An In Vitro Study on the Interactions of Pycnogenol® with Cisplatin in Human Cervical Cancer Cells

Özet

Amaç: Kanser tedavisinde antikanser etkiyi artırmak ve sitotoksisiteyi azaltmak amacıyla kemoterapötik ilaçlar ile birlikte çeşitli bitkisel kökenli fenolik bileşiklerin kullanımı hedeflenmektedir. Bir fenolik bileşik olan Piknogenol® (PYC), birçok çalışmanın konusu olmaktadır. PYC’nin sisplatin ile etkileşme mekanizması tam olarak aydınlatılamadığı için insan serviks kanser hücrelerinde (HeLa) sisplatin sitotoksisitesi üzerine PYC’nin etkilerini belirlemeyi ve PYC’nin sitotoksik olmayan dozlarında PYC’nin genotoksisitesini değerlendirilmeyi hedefledik. Gereç ve Yöntemler: HeLa hücrelerinde, 24 ve 48 saatlik maruziyetlerde, PYC varlığında ve yokluğunda sisplatinin sitotoksisitesi 3-(4,5-dimetiltiyazol2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) yöntemi ile ölçüldü. Oksidatif DNA hasarına karşı PYC’nin etkisi Comet yöntemi ile değerlendirildi. Bulgular: Sisplatinin IC50 değeri 24 saat ve 48 saat için sırasıyla 22,4 µM ve 12,3 µM idi. PYC’nin IC50 değerleri 24 saat ve 48 saat için sırasıyla 261 µM ve 213 µM idi. Yirmi dört saatlik maruziyet için, PYC’nin, seçilen konsantrasyonlarda (15,6-500 µM) sisplatinin IC50 değerini önemli ölçüde azalttı. Kırk sekiz saat maruziyet için, PYC sisplatinin sitotoksisitesini 15,6-125 µM arasındaki konsantrasyonlarda değiştirmedi, ancak 250 µM ve 500 µM konsantrasyonlarda önemli ölçüde azalttı. PYC tek başına 10 µM ve 25 µM konsantrasyonlarında DNA hasarına neden olmadı, ancak daha yüksek konsantrasyonlarında (50-100 µM) DNA hasarını önemli ölçüde indükledi. Ayrıca, çalışılan tüm konsantrasyonlarında (10-100 µM) 50 µM H2 O2 tarafından indüklenen DNA hasarını önemli ölçüde azalttı.Sonuç: Sonuçlarımız PYC’nin genotoksik olmayan dozlarında HeLa hücrelerindeki sisplatin sitotoksisitesini arttırabileceğini göstermektedir. Bu sonuçlar, sisplatinin PYC ile birlikte servikal karsinomadaki antikanser etkisine katkıda bulunabilir, ancak bunu doğrulamak üzere kanser hücre hatları üzerinde daha ileri in vitro çalışmalara ve in vivo çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract

Objectives: In the treatment of cancer, it is intended to increase the anticancer effect and decrease cytotoxicity using various plant-derived phenoliccompounds with chemotherapeutic drugs. Pycnogenol® (PYC), a phenolic compound, has been the subject of many studies. Since the mechanismsof the interactions of PYC with cisplatin need to be clarified, we aimed to determine the effects of PYC on cisplatin cytotoxicity in human cervixcancer cells (HeLa) and to evaluate the genotoxicity of PYC.Materials and Methods: The cytotoxicity of cisplatin and PYC was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)assay in HeLa cells for 24 h and 48 h. The effect of PYC against oxidative DNA damage was evaluated using the comet assay.Results: The IC50 values of cisplatin were 22.4 µM and 12.3 µM for 24 h and 48 h, respectively. The IC50 values of PYC were 261 µM and 213 µM for 24h and 48 h, respectively. For 24 h exposure, PYC significantly reduced the IC50 value of cisplatin at the selected concentrations (15.6-500 µM). For 48h exposure, PYC did not change the cytotoxicity of cisplatin at concentrations between 15.6 and 125 µM, but significantly reduced it at concentrationsof 250 µM and 500 µM. PYC alone did not induce DNA damage at concentrations of 10 µM or 25 µM; however, it significantly induced DNA damageat higher concentrations (50-100 µM). It also significantly reduced H2O2-induced DNA damage at all concentrations studied (10-100 µM).Conclusion: Our results suggest that PYC may increase the cisplatin cytotoxicity in HeLa cells at nongenotoxic doses. The results might contributeto the anticancer effect of cisplatin with PYC in cervical carcinoma, but in order to confirm this result further in vitro studies with cancer cell linesand in vivo studies are needed.