Plant regeneration from callus culture of clematis gouriana roxb. – A rare medicinal plant

Nadir bulunan bir tıbbi bitki olan clematis gouriana roxb.’un kallus kültüründen bitki rejenerasyonu

Özet

Sarmaşık türü olan Clematis gouriana tıbbi bitkisinin gövde kailus kültürü in vitro rejenerasyon çalışmaları için standardize edilmiştir. Bitkiden alınarak kültür ortamına yerleştirilen eksplantlarda, 0,5 'den 1,5 mg I"1 BAP ve 0,1 'den 0,5 mg I"1 NAA ilave edilen MS-besiyerinde kailus oluşumu çalışılmıştır. Kailus oluşumu 1,0 mg I"1 BAP ve 0,3 mg I"1 NAA konsantrasyonda optimize edilmiştir. Kailus oluştuktan hemen sonra FAP ve 0,5 mg I"1 indol-3-butirik asit (IBA) içeren MS-besiyerine aktarılmıştır .Yaklaşık 2-6 hafta süre aynı besiyerinde inkübe edilen kailus kütlesinden filizlenen tomurcuklar gözlemlenmiş ve daha yüksek frekanslı (her bir eksplant için filizler 11,1 ± 0,23 olması) bitkiciklerin rejenerasyonuna dikkat edilmiştir. Küçük filizler, hem MS temel besiyerinde hem de 0,5 mg I"1 IBA ilave edilen besiyerinde büyüme düzenleyicileri olmadan iyi bir şekilde gelişmiştir. Yeniden üretilen filizler 0,5 mg T1 IBA içeren besiyerinde bütün bitkicikleri oluşturmuş ve olgunlaşan bitkiler tespit edilmiş, iklim koşullarına alıştırılmış ve sera koşullarında büyütülmüştür. Bu çalışmada geliştirilen rejenerasyon protokolü bitki üreme hücrelerinin korunması ve bu tıbbi bitkinin biyoaktif bileşenlerinin daha ileriki çalışmalarda araştırılması için bir temel oluşturmaktadır.

Abstract

An in vitro regeneration protocol through stem callus culture has been standardized for the medicinal climber Clematis gouriana. The explant induced callus on MS-medium supplemented with 0.5 to 1.5 mg I"1 BAP and 0.1 to 0.5 mg I"1 NAA. The optimized callus induction occurred at the concentration of 1.0 mg I"1 BAP and 0.3 mg I"1 NAA. After initiation of callus, it was immediately transferred to MS medium containing 4.0 mg I"1 FAP and 0.5 mg I'1 indole-3-butyric acid (IBA). Upon longer incubation for about 2-6 weeks on the same culture medium initiation of shoot buds from the callus mass was observed and regeneration of plantlets with higher frequency (mean of 11.1 ± 0.23 shoots per explants) was noted. The microshoots rooted well on MS basal medium without growth regulators, as well as on medium supplemented with 0.5 mg I"1 IBA. Regenerated shoots formed complete plantlets on medium containing 0.5 mg I"1 IBA, and mature plants were established, acclimatized, and thrived in greenhouse conditions. The regeneration protocol developed in this study provides a basis for germplasm conservation and for further investigation of bioactive constituents of this medicinal plant.