Silika jel yöntemi ile tam kandan DNA eldesi ve saflaştırılması

Isolation and purification of DNA from peripheral whole blood by silica gel method

Özet

Geleneksel yollarla tam kandan DNA eldesi zaman ve emek-yoğun bir uygulamadır. İşlem beyaz küre hücrelerinin kandan ayrımını, deterjanlarla lizis, proteinaz uygulaması, organik ya da inorganik ekstraksyon ve presipitasyon aşamalarını içerir. Bu çalışma ile kullanımı önerilen yöntem silika jel ile DNA eldesidir ve nükleik asitlerin yüksek tuz konsantrasyonlarında silika jel partikülleri tarafından absorbe edilmesi, düşük tuz konsantrasyonlarında çözeltiye salınması temel ilkesine dayanmaktadır. Sunulan çalışmada genel amaçlı moleküler biyolojik laboratuvar sarfları ile insan tam kan örneklerinden mikrolitre ölçeğinde, 15-20 dakikada verimli ve saf DNA eldesi, seçilen silika jel türü, lizis ve yıkama solüsyonlarının optimizasyonları ile sağlanmıştır.

Abstract

The traditional procedure for whole blood DNA isolation is laborious and time consuming. It comprises separation of white cells' fraction from the whole blood, lysis with detergent, digestion with proteinase, extraction with phenol and precipitation of DNA with alcohol. Here we present an alternative, simple and inexpensive procedure in which the pure DNA is extracted from the microliter scale whole blood within 15-20 min. The high yield and quality of the product are provided by use of the selected glass-based sorbent and optimized composition of lysing and washing solutions.