Radiation Induced TLR-8 Expression and TGF-β/TNF-α Production in BV2 Microglial Cells

BV2 Mikroglial Hücrelerde Radyasyona Bağlı TGF-β/TNF-α Yapımı ve TLR-8 Artış

Özet

Amaç: BV2 mikroglial hücrelerde radyasyona bağlı TLR-8 mRNA artışının ve yangı öncesisitokinlerin gözlemlenmesi.Metod: BV-2 hücrelerinde değişik zaman dilimlerinde (1,3,6,12,24,48 ve 72 saat) kantitatiffloresan PCR ve akım ölçümleri ile TLR-8 mRNA artış ve dağılımının 16 Gy tek doz ya da 24saat sonra değişik (2, 5, 10, 16, 20, 30 ve 40 Gy) doz radyasyon sonrası analizi yapıldı. BV-2hücre süzüntüsünde ELISA kullanılarak TNF-α ve TGF-β yoğunlukları ölçüldü.Sonuçlar: TLR-8 mRNA artışı BV2 mikroglial hücrede %32,08 ve membranda %41,98olmak üzere 0,000639 ± 0,00016 idi. Radyasyon sonrası (16 Gy) TLR-8 mRNA artışı 24 saatiçinde en yüksek değere erişti. TLR-8 mRNA 2 Gy radyasyon sonrası artış göstermeyebaşlayarak 16Gy dozunda en üst düzeye ulaştı. BV2 mikroglial hücre süzüntüsünde 48 saatiçinde TGF-β konsantrasyonunda giderek artış gösteren bir yükseklik saptandı. TNF-αdüzeyinde de hafif bir etki bulundu.Yargı: Bulgular radyasyon ile oluşturulan beyin hasarlanmasında TLR-8 öncülüğündekimikroglia aktivasyonu ve TGF-β salınımının sorumlu olabileceğini gösterdi.

Abstract

Objective: To observe the radiation-induced TLR-8 mRNA expression and production ofproinflammatory cytokines in BV2 microglial cells.Methods: TLR-8 mRNA expression and distribution in BV-2 cells was analyzed byfluorescent quantitative PCR and flow measurement at different time point (1, 3, 6, 12, 24, 48and 72 h) after a single 16 Gy dose of radiation, or at 24 h after various doses of radiation (2,5, 10, 16, 20, 30 and 40 Gy).. ELISA was used to determinate the concentration of TNF-α andTGF-β in the supernatant of BV-2 cells.Results: The expression of TLR-8 mRNA in BV2 microglia cells was 0.000639 ± 0.00016,with 41.98% in the membrane and 32.08% in the cell. After 16 Gy radiation, the TLR-8mRNA expression increased at 1h after radiation, with peak at 24 h. TLR-8 mRNA increasedafter 2 Gy radiation, and the value increased to top at 16 Gy. There was a steady increase inthe concentration of TGF-β in the supernatant of BV2 microglial cells 48 h later. A slighteffect on TNF-α was also found.Conclusion: The data suggests that TLR-8-induced activation of microglia and the release ofTGF-β might be responsible for brain injury induced by radiation