The Effect of Dichloronitrophenol on Amyloid Beta Toxicity and Steroid Levels

Özet

Demansın en sık sebebi olan Alzheimer Hastalığı'nda Amiloid Beta (AB) birikimi nörodejeneratif süreçte nedensel rol oynar. AB peptid pek çok steroidin prekürsörü olan dehidroepiandrosteron (DHEA) sentezini indükler. Nörosteroidler nöronal canlılığı düzenler ve serbest ya da sülfa konjügat formda olmalarına göre farklı etkiler gösterirler. Nitrofenoller AB peptit agregasyonunu rölatif olarak düşük konsantrasyonlarda inhibe edebilirler. 2,4dikloro-6-nitrofenol (DCNP) nitrofenollerin küçük, suda çözünebilen türevi olup steroid sülfotransferaz enziminin inhibitörü olarak da bilinir. Ancak DCNP'nin farklı steroid düzeylerine ve hücre canlılığına etkileri henüz tam olarak bilinmemektedir. Bu çalışma DCNP'nin farklı steroid düzeylerine ve AB'nın indüklediği hücre ölümüne etkilerini araştırmayı hedeflemektedir. SH-SY5Y hücrelerine 72 saat süreyle DCNP (1µM) ve agrege edilmiş AB 1-42 peptit (10 µM) uygulandı. Hücre canlılığı MTT redüksiyon metodu ve immunfloresan mikroskop ile değerlendirildi. Hücresel DHEA, DHEA sülfat ve seks steroidlerinin değişimi LC-MS/MS ile belirlendi. DCNP'nin AB agregatlarının ultrastrüktürel yapısına olan etkisi transmisyon elektron mikroskop ile değerlendirildi. 72 saat boyunca DCNP uygulaması DHEA sülfat düzeyini anlamlı azaltırken, DHEA düzeyinde artışına neden oldu. SH-SY5Y hücrelerine AB 1-42 agregatlarının uygulanması, hücre canlılığını yaklaşık %50 azaltırken, DHEA ve östradiol düzeylerini de anlamlı değiştirmiştir. AB 1-42'nin indüklediği hücre ölüm oranı DCNP uygulaması ile azalmıştır. AB agregatları DCNP ile sulu ortamda inkübe edildiğinde agregat boyutlarında başlangıç ile kıyaslandığında anlamlı küçülme meydana gelmiştir. Bu çalışma, literatür bilgilerimize göre DCNP'nin AB toksisitesi üzerine faydalı etkilerinin gösterildiği ilk çalışma niteliğindedir

Abstract

In Alzheimer's disease (AD), which is the most common cause of dementia, the accumulation of amyloid beta (AB) peptides has a causal role in the neurodegeneration process. AB peptides can induce synthesis of dehydroepiandrosterone (DHEA), which is a precursor of various steroids. Neurosteroids are modulators of neuronal survival and may have different effects depending on whether they are free or sulfa-conjugated. Nitrophenols can inhibit the aggregation of AB peptides at relatively low concentrations. 2,4dichloro-6-nitrophenol (DCNP) is a small water-soluble derivative of nitrophenols, and it is also known as the inhibitor of steroid sulfotransferase enzyme. However, the effects of DCNP on levels of distinct steroids and cell viability is not yet clearly known. This work aimed to investigate the effects of DCNP on various steroid levels and AB-induced cell death. SH-SY5Y cells were treated with DCNP (1 µM) and aggregates of AB 1-42 peptides (10 µM) for 72 hours. Cell viabilities were evaluated using MTT reduction and immune-fluorescence microscopy. The cellular changes of DHEA, DHEA sulfate, and sex steroids were determined using liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS). The effect of DCNP on ultrastructure of AB aggregates was also examined with transmission electron microscopy. Seventy-two-hour treatment with DCNP significantly decreased DHEA sulfate and increased DHEA levels. Treatment with AB 1-42 aggregates decreased cell viability to approximately 50% and significantly changed DHEA and estradiol levels in SH-SY5Y cells. The ratio of cell death induced by AB 1-42 was reduced with DCNP treatment. When the AB aggregates were incubated in the aqueous solution with DCNP, the size of the aggregates became significantly smaller compared with the initial size. According to our literature knowledge, this is the first study to show the beneficial effects of DCNP on AB toxicity