Immunohistochemical analysis of basement membrane formation in embryoid bodies derived from embryonic stem cells

Embriyonik kök hücrelarinden farklılanan embriyoblastlarda gelişen basal membranın immunohistokimyasal olarak incelenmesi

Özet

Organ ve dokulardaki hücrenin temel biyolojik fonksiyonlarında önemli rol oynayan basal membranın, yapısı, organizasyonu ve regülasyonu günümüzdeki araştırma konularındandır. Bu nedenle, embriyonik kök hücrelerinden gelişen embriyoblastlardan oluşan basal membranın yapısı elektron mikroskobik ve indirekt immunohistokimya teknikleri ile incelenmiştir. Basal membranın formasyonu ilk olarak 1 günlük kültür yapılmış embriyoblastlarda gözlendi. Basal membran proteinleri olan laminin, kollagen IV, nidogen ve perlekanın immunoreaktivitelerinin pozitifliği bir günlük kültürde bir çizgi şeklinde saptandı. Embriyoblastların 1 hafta sonraki kültür dönemlerinin analizlerin de ise, basal membranın kalın bir tabaka olarak laminin, kollagen IV, nidogen ve perlekan antikorları ile immunohistokimya tekniği ile boyandığı gözlendi. Yapısal ve kalınlık açısından embriyoblastlarda farklılanan basal membranın TEM yöntemi ile Reichert'ın membranına benzediği gözlendi. Reichert'ın membranı primitif endoderm hücrelerinden farklılanan ve basal membran proteinlerini salgılayan parietal hücreler (Smith and Strickland, 1981; Hogan et al., 1981; Dziadek et al., 1985; Paulsson et al., 1985) ve trofoektoderm hücrelerinin basal membranı (Hogan et al., 1984; Salamat et al., 1995) tarafından oluşturulur. Bununla beraber, embriyonun iç hücre kitlesinden faklılanan embriyonik kök hücreleri trofoektoderm hücrelerine faklılanamaz. Bu nedenle, embriyoblastlarda gelişen basal membranın Reichert' in membranının gelişiminden farklı bir mekanizma ile geliştiği düşünülmektedir. Tabiki, immunohistokimyasal olarak embriyoblastlardan gelişen basal membranın tipi ayırt edilemez.

Abstract

The central role of basement membranes in organ and celli biology has made them an important subject for researchers who are investigating their structure, organisation and regulatory functions. Our study employed indirect immunohistochemistry to investigate the formation of basement membranes in embryonic bodies