Hematoloji ve onkoloji için protein esaslı bir ilaç adayı olarak rekombinant insan G-CSF üretimi

Recombinant human G-CSF production as a protein based drug candidate for hematology and oncology

İsa GÖKÇE, Yasemin BOZKURT, Seçil ERDEN TAYHAN, İsmail Furkan TURAN, Sema BİLGİN

Özet

İnsan granülosit koloni uyarıcı faktör (hG-CSF),CSF ailesinin bir üyesidir. Bu çalışmanın temel amacı, anjiyogenez bazlıklinik uygulamalar için önemli bir terapötik protein olan rekombinant insan G-CSF (rhG-CSF)’ sinin üretimi olarak belirlenmiştir. rhG-CSF, bir Escherichia colisuşu olan BL21 (DE3) pLysE’de pTOLT vektör sistemi ile inklüzyon cisimciği olarak üretilmiştir.rhG-CSF, Ni-NTA agaroz afinite kromatografisi aracılığıyla saflaştırılmış ve SDS-PAGE analizi ile karakterize edilmiştir. Bu terapötik proteinin hücre canlılığı üzerine etkisi MTT testi ile değerlendirilmiştir. Ek olarak, üretilen rhG-CSF’nin anjiyogenik potansiyeli, HUVEC hücre hattı ile gerçekleştirilen in vitro çizik analizi ile araştırılmıştır. Sonuçta, saflaştırılmış proteinin hücre proliferasyonunu arttırdığı görülmüş ve protein temelli bu ilaç adayının EC50 değeri, 0.051 mM olarak hesaplanmıştır. Ekolarak, HUVEC hücrelerininmigrasyonyeteneklerininrhG-CSFile konsantrasyona bağlı bir şekilde arttığı belirlenmiştir.

Abstract

The human granulocyte colony stimulating factor (hG-CSF) is a member of the CSF family. The first purpose of this study was production of recombinant human G-CSF (rhG-CSF) which is an important therapeutic protein for angiogenesis based clinical applicaitons. rhG-CSF was produced as inclusion body in the Escherichia coli strain BL21 (DE3) pLysE with pTOLT vector system. The rhG-CSF was purified by Ni-NTA agarose afinity chromatography and characterized with SDS-PAGE analysis. The effects of this therapeutic protein on cell viability was measured by MTT assay. Additionally, angiogenic potential of produced rhG-CSF was investigated via HUVEC cell line by in vitro scratch assay. As a result, the purified protein induced cell proliferation and the EC50 value of protein based drug candidate was 0.051 mM. Additionally, it was determined that the migration ability of the HUVECs was promoted by rhG-CSF in a concentration-dependent manner by in vitro scratch assay.