Dergiler / Harran Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi / 2018 / Cilt: 7 - Sayı: 2
Fiziksel ve Kimyasal Koşulların Çeşitli Yöntemlerle Elde Edilmiş Viral DNA’ya Etkileri
- Sayfa
- 149–153
- DOI
- —
Özet
DNA virusları tamir mekanizmaları ve RNA viruslarına göre daha stabil olmaları sayesinde çevre şartlarına dirençli bir yapı gösterirler. Sahip oldukları bu direnç mutasyonel değişiklikleri elimine ederek, virusun korunmuş bölgelerinin kolaylıkla amplifikasyonu sağlamasına rağmen, uygun olmayan laboratuvar koşulları ve inhibe edici ajanlar, viral DNA tespitine engel olabilmektedir. Viral DNA eldesinde çeşitli yöntemlerin karşılaştırılmasının yapıldığı bu çalışmada aynı zamanda farklı fiziksel ve kimyasal koşulların viral nükleik asite olan etkileri de sorgulandı. Bu amaçla biri konvansiyonel metot olmak üzere toplam dört farklı ekstraksiyon yöntemi bir parapoxvirus olan ecythma contagiosumun DNA’sını tespit amacıyla kullanıldı. Elde edilen DNA’lar verimlilikleri yönünden kıyaslandıktan sonra çeşitli fiziksel (basınç, UV) ve kimyasal (deterjan) koşullara maruz bırakıldı. Basınçlı buhar otoklavına maruziyetten sonra viral DNA amplifikasyonu gerçekleşirken; tween 20 ve uv radyasyon viral DNA amplifikasyonu inhibe ettiler. Ticari kitlerin çoğu DNA ekstraksiyonunun süresini kısaltmaya yardımcı olurken konvansiyonel yöntem viral DNA tespiti açısından en yüksek verimliliği sağladı.
Abstract
DNA viruses are more resistant to environmental conditions than RNA viruses due to their repair mechanisms and stablity of their genetic material. Despite these advantages, inadequate laboratory conditions and inhibitory agents can interfere with viral DNA detection. In this study, which compares various methods of viral DNA obtainment, the effects of different physical and chemical conditions on viral nucleic acid were also questioned. For this purpose, a total of four different extraction methods, one of which was the conventional method, have been used to detect the DNA of the parapox virus causing ecythma contagiosum. The isolated DNAs were exposed to various physical (pressure, uv) and chemical treatment (detergent) conditions before PCR amplification. While viral DNA amplification occured after exposure to autoclave pressure steam sterilizer; Tween 20 and UV radiation inhibited viral DNA amplification. While most commercial kits helped to shorten the duration of DNA extraction, the conventional method provided the highest efficiency for viral DNA detection.