Extraction,Partial Purification And Characterisation Of Polyphenol Oxidase From Tea Leaf ( camellia sinensis )

Polifenol Oksidazın Çay ( camellia sinensis ) Yaprağından Ekstraksiyonu,Kısmi Saflaştırılması Ve Karakterizasyonu

Özet

Polifenol oksidaz (PFO) çay yapraklar›ndan ekstrakte edilip (NH4)2SO4 çökeltmesi, diyaliz ve iyon değişim kromatografisi ile kısmen saflaştırılmıştır. Test edilen substratlardan, 127.8 mM Km de¤eri ile 4-metilkateflol PFO için en iyi substrat olarak belirlenmiştir. PFO aktivitesi için optimum pH 6.02 olarak saptanmıştır. Enzim, 4.03-7.00 gibi genifl bir pH aral›¤›nda aktivite göstermifltir. PFO aktivitesi için optimum sıcaklık 30°C olarak bulunmufltur. 20-80 °C’ler aras›nda enzim maksimum aktivitesinin %70’den fazlasını korumuştur. Aktivasyon enerjisi (Ea) ve Z değerleri, sırasıyla, 58.301 kJ/mol (r2= 0.961) ve 39.68 °C (rr2= 0.965) olarak bulunmuştur. Test edilen inhibitörlerden L-sisteinin en düşlük inhibisyon derecesine sahip olduğu belirlenmiştir

Abstract

Polyphenol oxidase (PPO) from tea leaves was extracted and partially purified through (NH4)2SO4 precipitation, dialysis and ion exchange chromatography. Of the substrates tested, 4-methylcatechol was the best substrate for PPO with a Km value of 127.8 mM. The optimum pH for PPO activity was found to be 6.02. The enzyme showed high activity over a broad pH range of 4.03-7.00. The optimum temperature for PPO activity was 30 °C. The enzyme had more than 70% of the maximum activity between 20-80 °C. Energy of activation (Ea) and Z values were found to be 58.301 kJ/mol (r2= 0.961) and 39.68°C (r2= 0.965), respectively. Of the inhibitors tested, L-cysteine was the least potent inhibitor.