Dergiler / Erzincan Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi / 2016 / Cilt: 9 - Sayı: 2 ÖZEL SAYI 1
Siirt Tiftik Keçisi Böbrek Dokusundan Karbonik Anhidraz Enziminin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Bazı Biyokimyasal Özelliklerinin Araştırılması
- Sayfa
- 1–9
- DOI
- —
Özet
Karbonik anhidrazlar (CA) (E.C:4.2.1.1) bakteri gibi en basit organizmalardan bitki ve hayvan gibi en kompleks canlılara kadar yaygın şekilde dağılmış çinko içeren bir grup metaloenzimdir. CA inhibitörleri köpek ve kedilerin glukoma tedavisinde kullanılan başlıca ilaçların birkaçıdır. CA enzimleri daha önceki çalışmalarda afinite kromatografisi yöntemi ile başarılı bir şekilde koyun, tavuk, balık, sığır ve insan gibi pek çok canlıdan saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir. Bu çalışmada ise CA enzimi, Siirt Tiftik Keçisi böbrek dokusundan Sepharose-4B-L-tirozin-sülfanilamid afinite kolonu kullanılarak 902,9 EU x mg-1 spesifik aktivite ile % 50,19 verimle 83,54 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığı SDS-PAGE ile doğrulandı. Siirt Tiftik Keçisi böbrek CA enziminin karakterizasyonu yapıldığında; optimum iyonik şiddeti=25 mM, optimum sıcaklığı=45ºC, optimum pH'sı=8,5 ve stabil pH'sı=7,0 olarak belirlendi. Saflaştırılan CA enzimi üzerine Al3+, Ni2+, Cd2+, Pb2+, Ba2+, Zn2+, B3+, Fe3+, Se2+, Ag+ ve Co2+ metal iyonlarının inhibitör etkileri incelendi. İnhibisyon gösteren metallerin IC50değerlerini bulmak amacıyla inhibisyon grafikleri çizildi.
Abstract
Carbonic anhydrase (CA) (E.C:4.2.1.1) is a group of metalloenzyme containing zinc widely distributed from the simplest organisms such as bacteria to the most complex organisms such as plants and animals. CA inhibitors are some of the principal drugs used in the management of canine and feline glaucoma. In earlier studies; CA enzymes successfully have been purified and characterized from many living things such as; sheep, chicken, fish, bovine and human. In this study, the CA enzyme has purified from Siirt Mohair Goat kidney tissue with 902.9 EU x mg-1 of specific activity, 50.19% of purification yield and 83.54 of purification folds by using Sepharose-4B-L-tyrosine-sulfonamide affinity column. The purity of the purified enzyme has confirmed by SDS-PAGE. As the characterization of CA enzyme's in Siirt Mohair Goat kidney has been done; the optimum ionic strength=25mM, the optimum pH=8.5, the optimum temperature=45ºC and the stable pH=7.0 has been determined. Inhibitory effects of Al3+, Ni2+, Cd2+, Pb2+, Ba2+, Zn2+, B3+, Fe3+, Se2+, Ag+ and Co2+metal ions have been examined on the purified CA enzyme. Inhibition graphics have been drawn in order to find the IC50 values of metals showing inhibition.