Preinkübasyon ısısının ve bazı metal iyonlarının insan humor vitreus arginazı üzerine etkileri

The effects of preincubation temperature and some metal ions on human vitreous arginase

Özet

Amaç : Üre döngüsünün en son basamağını katalize eden arginaz, Mn iyonlarına kofaktör olarak gereksinim duyan bir enzimdir. İnsan eritrosit ve karaciğerinde arginazın +2 değerlikli Mn iyonlarıyla 50-55"C preinkübasyonu sonucu maksimum aktivite elde edilmiştir.İnsan humor vitreus arginazı üzerine preinkübasyon ısısı ve metal iyonlarının etkisini araştırmak amaçlanmıştır. Gereç ve yöntem: Arginaz aktivitesi ölçümünün esası, L-argininin arginazla hidrolizi tarafından oluşan ürenin spektrofotometrik TDMU yöntemiyle ölçümüne dayanır. Bulgular: İnsan humor vitreus arginazı için preinkübasyon ısısı 40"C olarak bulunmuştur. Preinkübasyonun 50 - 55"C de yapılması % 5 - 7 dolaylarında aktivite kaybına neden olmuştur. Enzimin 40"C de Pb, Hg, Ağ, Cu ve Sn gibi metallerle preinkübasyonu % 80 - 85, Ba, Fe , Cr ve Ca ile % 60 -70 ve Mg ve Co ile % 30 - 40 dolaylarında inhibisyona neden olmuştur. Mn iyonları enzimin aktivitesini % 36 oranında arttırmıştır. Ni enzim aktivitesini değiştirmemiştir. Mn inkübasyon ortamına ilave edildiğinde aktivasyon % 12 dolaylarına düşmüştür. Sonuç: Sonuç olarak,diğer doku arginazları Mn iyonları yokluğunda hemen hemen inaktif durumda iken vitreus arginazı Mn iyonları yokluğunda da belirgin olarak aktivite gösterdiği saptanmıştır.

Abstract

Purpose : Arginase is an enzyme which catalyses the last step of urea cycle and needs Mn iones as a cofactor during this procedure. It has been reported that the maximum activity of arginase in human erythroytes and liver was obtained in the presence of Mn ions at 50-55"C preincubation temperature. The aim of this study was to investigate effects of preincubation temperature and some metal ions on human vitreous arginase. Material and methods: The principle that determines the arginase activity is spectrophotometric measurement of urea produced by the hydrolysis of L-arginine by arginase. The spectrophotometric determination is made according to TDMU method. Results: Preincubation temperature for human vitreous humor arginase -was found to be 40 "C. The arginase activity decreased around 5-7 % when the preincubation temperature was increased to 50 - 55"C. The preincubation of the enzyme at 40 "C with some metal ions caused a decrease in its activity. The inhibition of the enzyme was around 80 - 85 % with Pb , Hg, Ag, Cu and Sn, 60-70% with Ba, Fe, Cr, Co and 30-40% with Mg and Co. In contrast, Mn ions increased the enzyme activity by 36 %. Ni iones had no effect on the enzyme activity . When Mn iones were added to the incubation medium, the arginase activity was decreased by 12 %. Conclusion: It was determined that vitreous arginase was active even in the absence of Mn ions, whereas under these circumstances other tissue arginases were almost inactive.