Purification and characterization of $alpha$-galactosidase from Thermus thermophilus HB8

Thermus thermophilus HB8'den $alpha$-galakstosidazin saflaştırılması ve karakterizasyonu

A.Akın DENİZCİ, Figen ZİHNİOĞLU, Seçil ÖNAL, Erhan DİNÇKAYA, Azmi TELEFONCU

Özet

Yüksek termal kararlılığa sahip bir enzim olan $alpha$-galaktosidaz, aseton çöktürmesi, iyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyon yöntemleri kullanılarak 83-kat saflaştırıldı. $alpha$-Galaktosidazın molekül kütlesi 220.000 Da olarak bulundu. Optimum pH 6.0 ve optimum temperatür 80° C olarak belirlendi. Substrat olarak p-nitrofenil-$alpha$-D-galaktopiranozid (pNPG) kullanılarak $K_m$ değeri 1.4x$l0^{-3}$ M olarak tesbit edildi. Enzimin optimum temperatür ve termal kararlılık özellikleri onun özellikle yüksek temperatürlü prosesler için uygunluğunu ortaya koydu.

Abstract

A highly thermostable $alpha$-galactosidasc was purified 83-fold from Thermus thermophilus HB8 by acetone precipitation, ion exchange chromatography and gel filtration. The molecular weight of the enzyme was estimated as 220000 Daltons. The pH and temperature optima were 6.0 and 80°C, respectively. The $K_m$ value for p-nitrophenyl-$alpha$-D-galactopyranoside (pNPG) was 1.4x$l0^{-3}$ M. Both the high temperature optima and thermostability properties of the enzyme make it particularly suitable for high temperature processes.