Ketoprofenin 6- Fosfoglukonat Dehidrogenaz Aktivitesi Üzerine In Vitro ve In Vivo Etkisinin Araştırılması

In Vitro and In Vivo Effect of Ketoprofen on 6- Phosphogluconate Dehydrogenase Enzyme Activity

Özet

Bu çalışmada 6- fosfoglukonat dehidrogenaz (E.C.1.1.1.44;6PGD) enzimi insan eritrositlerinden saflaştırıldı. Saflaştırmaişlemi hemolizatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2,5- ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi yöntemi ilegerçekleştirildi. Enzimin saflık derecesi SDS- PAGE elektroforez yöntemi ile belirlendi. Enzim üzerine ketoprofenin in vitro vein vivo etkisi araştırıldı. Tüm saflaştırma işlemleri sonunda insan eritrosit 6PGD enzimi 742 kat saflaştırıldı. Eritrosit 6PGDenzimi %50 verimle, spesifik aktivite 0.46 U/mg olarak elde edildi. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 340 nmdeBeutler metoduna göre ölçüldü. Çalışmada kullanılan ketoprofen ilacının in vitro şartlarda enzim aktivitesini inhibe ettiğigözlendi. I n vitro inhibe eden bu ilaca ait ΙC50 değeri düşük olarak belirlendi. Daha sonra ketoprofenin in vivo inhibisyonetkisini belirlemek amacıyla Yeni Zelanda albino türü tavşanlar ile çalışmalar yapıldı. İlacın 6PGD enzim aktivitesi üzerine invivo etkisi incelendiğinde I. saatte (P

Abstract

In this study, 6- phosphogluconate dehydrogenase (E.C.1.1.1.44; 6PGD) was purified in human erythrocytes. Thisprocess was carried out by the preparation of hemolysate, precipitation by (NH4 ) 2 SO4 and 2',5'- ADP Sepharose 4B affinitychromatography . The degree of purity of the enzyme was determined with SDS- PAGE electrophoresis. The effect ofketoprofen on the enzyme was investigated in vitro and in vivo. Human erythrocyte 6PGD was purified in 742- fold at theend of all purification processes. The recovery of 6PGD was 50%, and its specific activity was 0.46U/mg in erythrocytes.Enzyme activity was spectrophotometrically measured using the Beutler method at 340 nm. Ketoprofen inhibited theenzyme activity in in vitro conditions. IC50 value of the drug inhibition in vitro was determined. For the drug having low IC50 value (drug concentrations which produce 50% inhibition) (ketoprofen), in vivo studies were performed in New Zealandalbino rabbits. In the evaluation of the in vivo effect of drug on 6PGD activity, it was observed that ketoprofen given at thefirst (P