Çeşitli örneklerden elde edilen Klebsiella pneumoniae izolatlarının biyosensör ile hızlı teşhisi ve genotiplendirilmesi

Rapid identification of Klebsiella pneumoniae isolates from various samples with biosensor and genotyping

Özet

İçme sularında Klebsiella türlerine rastlanmasının en önemli sebebi, hayvan dışkılarının içme suyu kaynaklarına sızmasıdır. Son yıllarda, biyosensör teknolojisi hızlı tespit ve güvenilirliği sayesinde diğer yöntemlerin yerini almaya başladı. Bu çalışmada biyosensör teknolojisinin Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae)’ nin hızlı tespitindeki güvenilirliğinin belirlenmesi ve hayvan dışkısı ile kirlenmiş olduğu düşünülen içme suyundan izole edilen K. pneumoniae izolatları arasındaki ilişkinin varlığının tespit edilmesi amaçlandı. Bu amaçla K. pneumoniae izolatlarının tespiti için, portatif, mikroakışkan, elektrokimyasal biyosensör cihazı sürüm 2 (V2) kullanıldı ve sonuçlar VITEK Matriks aracılı lazer desorpsiyon/iyonizasyon-uçuş zamanlı kütle spektrometresi (VITEK MS) otomatik tanımlama sistemi ile doğrulandı. K. pneumoniae izolatlarının genotiplendirilmesinde değişken alanlı jel elektroforezi (PFGE) ve çok lokuslu değişken sayıda ardışık tekrar analizi (MLVA) yöntemleri kullanılarak sonuçlar karşılaştırıldı. İzolatlar PFGE analizi ile 6, MLVA ile ise 23 farklı genotipe ayrıldı. Çevresel ve klinik izolatlar arasında benzer genotiplerin görüldüğü belirlendi. Bu çalışmanın temel amacı; içme suyundan, hayvan ve insan dışkısından izole edilen K. pneumoniae örneklerinin MLVA ve PFGE yöntemi ile karşılaştırılmasıdır. Bunun ile birlikte ilk kez K. pneumoniae tayini için sinyalleri altın nanopartiküler ile güçlendirilmiş elektrokimyasal biyosensör cihazı kullanılmıştır.

Abstract

The most important cause of Klebsiella spp. contamination of drinking water is the leakage of animal faeces into drinking water sources. Recently, the biosensor technology has quickly begun to replace other methods with its faster finding and reliability. The aim of this study was to investigate the reliability of the biosensor technology in the rapid detection of Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae) and to determine the presence of the relationship between K. pneumoniae isolates isolated from the drinking water thought to be contaminated by animal faeces and the clinical isolates. For this purpose, portable, microfluidic electrochemical sensor device version 2 (V2) was used for the detection of K. pneumoniae and results were confirmed with VITEK MALDI-TOF Mass Spectrometry (VITEK MS) automated system. For the molecular typing of K. pneumoniae isolates, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multiple locus variable-number tandem repeat analysis (MLVA) methods were employed and the results were compared. For these bacteria, the most appropriate typing method was tried to be determined comparatively. PFGE analysis indicated the presence of six different strains, while MLVA divided them into 23 clusters. Clonal relationships were viewed between environmental and clinical isolates. The main goal of this paper is to present, the detailed report of the comparison of the samples isolated from drinking water, animal and human faeces for K. pneumoniae. To accomplish of this goal we introduced that MLVA and PFGE methods. Also, gold nanoparticies enhanced electrochemical biosensor device is used for the determination of K. pneumoniae for the first time.