Dergiler / Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi / 2022 / Cilt: 69 - Sayı: 2
Eksplant kültür ve amniyotik membran kaynaklı kök hücrelerin çok yönlü farklılaşması
- Sayfa
- 191–199
- DOI
- —
Özet
Amniyotik membran kaynaklı kök hücrelerin (AMKH) multipotent kök hücrelere göre daha yüksek potansiyele sahip hücreler olduğu bildirilmiştir. Bu hücreler düşük immunojeniteye sahiptir ve teratojenik etkileri yoktur. Enzimatik yöntemlere dayanan çeşitli konvansiyonel metodların yanında eksplant kültür metodu, kök hücrelerin elde edilmesinde kolay ve ekonomik bir yöntem olarak görülmektedir. Çalışmada sıçan amniyotik membranından AMKH’lerin izole edilmesi ve daha sonra in vivo çalışmalarda kullanmak adına yapılan nörosfer farklılaştırması da dahil olmak üzere çoklu farklılaştırma çalışmaları ile hücrelerin karakterizasyonu amaçlandı. Amniyotik membranlar Wistar ırkı sıçanlardan gebeliklerinin 17. gününde toplandı. Bir takım işlemler sonrasında amniyotik membranlardan eksplant kültür metodu ile AMKH’ler izole edildi ve 10. pasaja kadar çoğaltıldı. Hücrelerin iki katına çıkma süreleri hesaplandı ve 5 ile 9. pasajlarda hücrelerin büyüme eğrisi parametreleri analiz edildi. Üçüncü pasajdan sonraki hücrelerde osteojenik ve adipojenik farklılaştırma çalışmaları yapıldı. AMKH’ler nörojenik indüksiyon medyumu ile nörosferlere farklılaştırıldı. Daha sonrasında hücreler mezenkimal, hemapoietik ve nörojenik belirteçlerin ifadesi bakımından immunositokimyasal boyama ve PCR analizi ile incelendi. Çalışma eksplant kültür ile izole edilen AMKH’lerin uygun koşullar altında nörosfer oluşturma kapasitesine sahip, güvenilir bir kök hücre kaynağı olduğunu ve in-vivo nöral dejenerasyon modellerinde kullanılabilecek yeni bir potansiyel aday olduğunu önermektedir.
Abstract
Amniotic membrane derived stem cells (AMSCs) are reported to have a comparatively higher potency than multipotent stem cells. These cells are shown to have low immunogenicity and no teratogenicity. Among various conventional methods of isolation using enzymes, explant culture method is believed to be an easy and cost-effective way to harvest stem cells. The purpose of this study was to isolate AMSCs from amniotic membrane of rats and to characterize them for multilineage differentiation, including generation of neurospheres to use them later in in-vivo experiments. Amniotic membranes were collected from Wistar rats on 17th day of pregnancy. After processing of the tissues, AMSCs were isolated by the explant culture method and continued to grow until 10th passage. The doubling time was estimated and the cells were analyzed for growth curve parameters at passages 5 and 9. The osteogenic and adipogenic differentiation studies were carried out from the same cells after 3rd passage. Neurospheres generation from AMSCs was performed using neurogenic induction media. The cells were further assessed for their mesenchymal, haemopoietic, and neurogenic marker expressions by immunofluorescence staining and PCR analysis The study suggests that AMSCs isolated through explant culture are reliable stem cells which could generate neurospheres under proper induction conditions and could be a potential candidate to be used on in-vivo neural degeneration models.