The effects of endothelial protein C receptor gene polymorphisms on sEPCR levels in venous thrombotic patients

Endotelyal protein C reseptör geni polimorfizmlerinin venöz trombozlu olgularda sEPCR üzerindeki etkisi

Özet

Amaç: Bu çalışmada, trombozda önemli bir role sahip olan EPCR genindeki varyasyonların tespit edilmesi ve bu varyasyonların Türk populasyonunda plazma sEPCR seviyeleri üzerindeki olası etkisinin incelemesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntemler: Çalışmamız 111 trombozlu olgu ve 73 sağlıklı kontrol içermektedir. EPCR geninin dört ekzonu intronlardan başlanan primerler kullanılarak PCR, SSCP ve DNA Dizi Analizi ile taranmıştır. Plazma sEPCR düzeyleri ELISA yöntemi kullanılarak ölçülmüştür. Bulgular: Bu çalışmada, EPCR haplotipleri ile sEPCR seviyesi arasındaki ilişki incelenmiş ve EPCR geninin taranan dört ekzonunda üç farklı polimorfizm saptanmıştır. Bunlardan C3998T (rs2069952) genin 2. intronunda, A1 haplotipini oluşturan C4678G (rs9574) ise EPCR geninin 3’ UTR bölgesinde tespit edilmiştir. EPCR geninde tespit edilen diğer bir polimorfizm ise A3 haplotipini oluşturan ve ekzon 4’de yer alan A4600G (rs867186) değişimidir. A3 allelini homozigot olarak taşıyan hastalarda ortalama sEPCR seviyesi 289 ng/μl iken, A1 allelini homozigot olarak taşıyanlarda 113,42 ng/μl’dır. Sonuç: İstatistik analizler kontrol ve hastalar arasında C3998T değişiminin tromboz riski açısından anlamlı olmadığını göstermiştir. A1 haplotipinin ise trombozdan koruyucu bir etkiye sahip olabileceği saptanmış ancak A1 (4678C>G) allelini taşıyan bireylerde sEPCR seviyesinde de anlamlı bir değişiklik saptanamamıştır. Buna karşılık A3 haplotipinin tromboz için 2.04 kat risk getirdiği ve A3 (4600A>G) alleli taşıyanların taşımayanlara göre daha yüksek sEPCR seviyesine sahip olduğu saptanmıştır. A3 haplotipi Türk populasyonunda hem trombotik riskle hem de artan sEPCR seviyesiyle ilişkilendirilebilir.

Abstract

Objective: The aim of this study was to investigate variations in the endothelial cell protein C receptor gene (EPCR gene) that may play a role in thrombosis and the effects of these variations on the plasma soluble endothelial cell protein C receptor (sEPCR) level in Turkish patients with venous thrombosis. Material and Methods: This study included 111 thrombosis patients and 73 healthy controls. Following DNA extraction, PCR, SSCP, and DNA sequencing analysis of 4 exons of the EPCR gene was performed. Plasma sEPCR was measured via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: In all, 3 polymorphisms were detected in exons 1-4. C3998T (SNP no: rs2069952) polymorphism was detected in intron 2 and C4678G (A1 haplotype) (SNP no: rs9574) in the 3’ untranslated region (3’UTR). There weren’t any significant differences in C3998T polymorphism between the control and patient groups. There wasn’t a significant difference in plasma sEPCR levels between both controls and patients that carried the A1 allele. A4600G substitution (A3 haplotype) (SNP no: rs867186) was observed in exon 4 and was associated with a 2.04-fold higher risk of thrombosis. A3 allele carriers had higher sEPCR levels than those without the allele. Mean sEPCR level in the patients with the homozygous A3 allele was 289 ng μL–1, versus 113.42 ng μL–1 in those with the homozygous A1 allele. Conclusion: The A1 haplotype might offer protection against thrombosis and the A3 haplotype might be associated both with elevated plasma sEPCR and elevated risk of venous thrombosis in the Turkish population. Plasma sEPCR levels were significantly higher in those that carried the A3 allele (4600A>G) (both patients and controls). Among the participants that carried the A1 allele (4678C>G), plasma sEPCR did not differ significantly.