Rapid Stability Indicating HPLC Method for the Analysis of Leflunomide and Its Related Impurities in Bulk Drug and Formulations

Bulk İlaç ve Formülasyonlarda Leflunomid ve İlgili Safsızlıklarının Analizi için Hızlı Stabilite Göstergeli YBSK Yöntemini

Özet

Objectives: Leflunomide (LFNM) is a drug that belongs to isoxazole derivatives and has immunosuppressive and anti-inflammatory activities.A literature search confirms that there is no method reported for the simultaneous estimation of LFNM and its related impurities A and B inpharmaceutical dosage forms or in bulk drug. Hence the present work aimed to develop a simple stability indicating RP-HPLC method for theseparation and quantification of LFNM and its impurities A and B.Materials and Methods: Systematic trials of method conditions like mobile phase ratio, pH, flow rate, stationary phase, and detector wavelengthwere performed for the simultaneous analysis of LFNM and its related impurities A and B. The developed method was validated as per the ICHguidelines including forced degradation studies in different stress conditions.Results: Optimized separation was achieved on a Thermo Scientific Hypersil ODS C18 column (250 mm×4.6 mm; 5 µm id) using mobile phasecomposition of acetonitrile, methanol, and 0.1 M sodium perchlorate in the ratio of 40:30:30 (v/v), pH 4.6, at a flow rate of 1.0 mL/min in isocraticelution. UV detection was carried out at a wavelength of 246 nm. Well-resolved peaks were observed with high numbers of theoretical plates, lowertailing factor, and reproducible relative retention time and response factor. The method was validated and all the validation parameters were foundto be within the acceptance limits. Stability tests were done through exposure of the analyte solution to five different stress conditions, i.e. 1 N HCl,1 N NaOH, 3% H2O2, thermal degradation of powder, and exposure to UV radiation. The method can successfully separate the degradation productsalong with both the impurities studied. The % degradation was also found to be less.Conclusion: The method developed for LFNM is simple and precise and can be applied for the separation and quantification of LFNM and its relatedimpurities in bulk drug and pharmaceutical formulations.

Abstract

Amaç: Leflunomid (LFNM), izoksazol türevine ait ve immüne süpresif ve antienflamatuvar aktiviteye sahip bir ilaçtır. Literatür taraması, farmasötik dozaj formlarında ve bulk ilaçlarda LFNM ve ilgili safsızlık A ve B’nin değerlendirilmesi için rapor edilen bir yöntemin olmadığını doğrulamaktadır. Bu nedenle bu çalışma, LFNM’nin ve A ve B safsızlıklarının ayrıştırılması ve miktarının belirlenmesi için hızlı stabilite göstergeli RP-YBSK yöntemini geliştirmeyi amaçlamıştır. Gereç ve Yöntemler: LFNM ve ilgili safsızlık A ve B’nin eş zamanlı analizi için mobil faz oranı, pH, akış hızı, stasyoner faz ve detector dalga boyu gibi metod koşullarının sistematik testleri gerçekleştirilmiştir. Geliştirilen yöntem farklı stress koşullarında zoraki bozunma çalışmalarını içeren ICH yönergelerine göre valide edilmiştir. Bulgular: Optimal ayrıştırma, Thermo Scientific Hypersil ODS C18 kolonu (250 mm×4,6 mm; 5 µm id) üzerinde, 40:30:30 (h/h) oranında asetonitril, methanol ve 0,1 M sodium perklorat bileşiminden oluşan mobil faz kullanılarak elde edilmiştir; izokratik elüsyonda 1,0 mL/dak akış hızında pH 4,6 idi. UV saptaması 246 nm dalga boyunda gerçekleştirilmiştir. İyi-kararlı pikler, çok sayıda teorik plaka, daha az kuyruklama faktörü ve tekrarlanabilir göreceli retansiyon süresi ve tepki faktörü ile elde edilmiştir. Yöntem valide edilmiştir ve tüm validasyon parametreleri kabul limitinde bulunmuştur. Stabilite testleri, analit çözeltisinin beş farklı stress koşuluna, yani 1 N HCl, 1 N NaOH, %3 H2 O2 , tozun termal degradasyonuna ve UV radyasyonuna maruz kalması yoluyla gerçekleştirilmiştir. Yöntem, bozunma ürünlerini çalışılan safsızlıklarla birlikte başarılı bir şekilde ayırabilmiştir. Yüzde degradasyon da daha az bulunmuştur. Sonuç: LFNM’nin ayrılması ve miktar tayini için geliştirilen yöntem basit ve kesindir ve bulk ilaç ve farmasötik formülasyonlarda LFNM’nin ve ilgili safsızlıklarının ayrıştırılması ve analizi için uygulanabilir.