DEVELOPMENT AND VALIDATION OF RAPID ISOCRATIC RP-HPLC METHOD FOR THE QUANTIFICATION OF SALMON CALCITONIN

Salmon Kalsitoninin Miktar Tayininde Hızlı ve İzokratik Ters Faz Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografisi Yöntemi Geliştirilmesi ve Validasyonu

Özet

Bu çalışmada salmon kalsitoninin miktar tayini için ters faz sıvı kromatografisi kullanarak UV dedektör ile (220 nm) basit ve hızlı bir izokratik yöntem geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Kromatografi için Agilent XDB--C18 marka kolon (I50x4.6 mm id, 35 ,um partikül boyutlu) kullanılmıştır. Hareketli faz 0.1 h/h trifloroasetik asit içeren su:asetonitril 65:35, h/h karışımı olup akış hızı mL/dak olarak belirlenmiştir. Her bir analiz iç standart olarak kullanılan triamsinolon asetonitle birlikte dk 'dan kısa sürmüştür. Yöntem ICH standartlarına göre özgül, hızlı, doğru, kesin ve tekrarlanabilir bulunmuştur. Kalibrasyon eğrisi 2.5--50 ,ug/mL aralığında doğrusallık göstermiştir (R2=0.999). Yöntemin geri kazanımı ortalama 100.64 'dür. Gün içi ve günler arası yüzde bağıl standart sapma değerleri 2.0 dir. Yöntem salmon kalsitoninin ham madde ve ticari preparatlarda miktar tayininde başarı ile hızlı ve doğru bir şekilde uygulanmıştır.

Abstract

In this study, we have developed and validated a simple and rapid isocratic reverse-phase high performance liquid chromatographic method with UV detection (220 nm) for quantification of salmon calcitonin. Chromatography was performed using an Agilent Eclipse XDB-C18column (150x4.6 mm i.d., 3.5 μm particle size) with a mobile phase (water:acetonitrile 65:35, v/v), containing 0.1% v/v trifluoroacetic acid at a flow rate of 1 mL/min. Each analysis requires less than 7 min including triamcinolone acetonide as an internal standard. The method has been validated for accuracy, precision, linearity, specificity, and sensitivity. The method has proved to be specific, rapid, accurate, precise and reproducible according to ICH standards. The calibration curve is linear in the concentration range 2.550 μg/mL; the correlation coefficient was 0.999. The method has showed good recoveries (average 100.64%) and the relative standard deviations intra- and inter-day were < 2.0%. The method has been successfully applied for the rapid and accurate quantification of salmon calcitonin in raw materials and commercial formulations