Investigation of the Presence of Sildenafil in Herbal Dietary Supplements by Validated HPLC Method

Bitkisel Diyet Takviyelerinde Sildenafil Varlığının Valide Bir HPLC Yöntemiyle Araştırılması

Özet

Objectives: As the first FDA-approved phosphodiesterase type 5 inhibitor, sildenafil (SDF) is widely used in the treatment of erectile dysfunctiondue to its strong pharmacodynamic activity. Since many food supplements are now involved in illegal adulteration, the presence of SDF in foodsupplements is very important because of their toxicological risks. In this study a simple fast, reliable high-performance liquid chromatographymethod with ultraviolet (UV) detector has been developed and validated for SDF analysis in herbal dietary supplements (HDSs).Materials and Methods: 10 mM phosphate buffer containing 0.1% triethylamine (pH 3.5) and acetonitrile (65:35, v/v), as mobile phase was appliedisocratically to a reverse phase C18 analytical (4.6×250 mm, 5 µm) column. Chromatographic separation was achieved by a C18 reverse-phaseanalytical column 4.6×250 mm, 5 µm particle size, using acetonitrile, with 10 mM phosphate buffer containing 0.1% triethylamine (65:35, v/v, pH3.5) as a mobile phase. The mobile phase flow rate was 1 mL min-1 and the column temperature was 35°C. The UV detector was set at 293 nm. Theliquid-liquid extraction method used in the study provided a simple and practical method for the recovery of SDF in HDSs and their obtained valuesranged from 87.6 to 111.7%.Results: The method showed linearity with an excellent correlation coefficient (r2>0.999). Moreover, it was specific and sensitive with the limit ofquantification, 6.5 ng mL-1. Intraday and interday method precision was ≤8.2 (relative standard deviation %). Intraday and interday method accuracywas between -4.0 and 7.1 (RE%). The method was strong according to the robustness test results obtained from UV detection, mobile phase bufferpH, column temperature, and flow rate changes. The described procedure was simple, fast, precise, and feasible for routine adulteration analysisof SDF, especially in food control or toxicology laboratories. This method was successfully applied to 50 individual solid and liquid form HDSs.Conclusion: The results showed that 37 out of 50 samples of HDSs (represented 74.0%) examined contained SDF between 0.01 and 465.47 mg/g,150.87±127.48 (mean ± standard deviation), which could lead to serious health problems and might even be fatal for consumers. The describedprocedure was found to be simple, rapid, precise and feasible for routine adulteration analysis of SDF, especially in food control or toxicologylaboratories.

Abstract

Amaç: FDA tarafından onaylı ilk fosfodiesteraz-5 inhibitörü olan sildenafil (SDF), güçlü farmakodinamik etkinliği sebebiyle erektil fonksiyon bozukluğunun tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Günümüzde birçok gıda takviyesi, yasadışı tağşiş işlemlerine dahil olduğundan, gıda takviyelerinin içerisindeki SDF varlığının belirlenmesi toksikolojik riskleri sebebiyle çok önemlidir. Bu çalışmada bitkisel gıda takviyelerinde (BGT) SDF analizi için basit, hızlı, güvenilir bir ultraviyole (UV) detektörlü yüksek performanslı sıvı kromatografi yöntemi geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Gereç ve Yöntemler: Mobil faz olarak içeriğinde %0,1 trietilamin bulunan 10 mM’lik fosfat tamponu (pH 3,5) ve asetonitril (65:35, v/v) bir ters faz C18 analitik kolonuna (4,6×250 mm, 5 µm) izokratik olarak uygulanmıştır. Mobil faz akış hızı 1 mL dk-1 ve kolon sıcaklığı 35°C idi. UV dedektör 293 nm’ye ayarlanmıştır. Çalışmada kullanılan sıvı-sıvı ekstraksiyon yöntemi, BGT’lerde SDF’nin geri kazanımı için basit ve pratik bir yöntem sağladı ve elde edilen değerleri %87,6 ila 111,7 arasındaydı. Bulgular: Yöntem, mükemmel bir korelasyon katsayısı ile doğrusallık göstermiştir (r2 >0,999). Ayrıca, metot 6,5 ng mL-1’lik tayin limitiyle seçici ve hassastı. Gün içi ve günler arası metot kesinlik ≤%8,2 (% bağıl standart sapma) idi. Gün içi ve günler arası metot doğruluk testi sonuçları (-4,0) ile 7,1 (%RE) arasındaydı. Metodun UV tespiti, mobil faz tampon pH’sı, kolon sıcaklığı ve akış hızı değişimlerinden elde edilen sonuçlarla sağlam olduğu görüldü. Bu yöntem birbirinden ayrı katı ve sıvı formdaki 50 adet BGT’ye başarıyla uygulanmıştır. Sonuç: Sonuçlar incelenen 50 adet BGT örneğinden 37’sinin (%74,0), 0,01 ile 465,47 mg/g, 150,87±127,48 (ortalama±standart sapma) ile kullananlarda ciddi sağlık sorunlarına yol açabilecek hatta ölümcül bile olabilecek kadar SDF içerdiğini gösterdi. Tanımlanan prosedürün, özellikle gıda kontrol veya toksikoloji laboratuvarlarında SDF’nin rutin tağşiş analizleri için basit, hızlı, kesin ve uygulanabilir olduğu görülmüştür.