Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2021 / Cilt: 55 - Sayı: 1
Yeni HIV Tanı Algoritmasına Geçiş Sürecinde Ulusal HIV-AIDS Referans Merkezi’nin Deneyimi: Line-İmmunoassay Test ve Bio-Rad Geenius™ HIV-1/2 Antikor Ayırt Edici Hızlı Doğrulama Testleri Karşılaştırmalı Analizi
- Sayfa
- 17–29
- DOI
- —
Özet
1981 yılında Amerika Birleşik Devletleri’nde ilk insan immün yetmezlik virüsü [Human ImmundeficiencyVirus (HIV)] enfeksiyonunun tespitinden kısa bir süre sonra, olgu sayısının tüm dünyada giderek artışgösterdiği belirlenmiştir. Türkiye’nin sahip olduğu yüksek turizm kapasitesi ve Avrupa ile Asya arasında uzanancoğrafik konumu, bireylerin olduğu kadar HIV dahil olmak üzere cinsel yolla bulaşan enfeksiyonlarında ülkeler arasında geçişi için kolaylık sağlamaktadır. Sağlık Bakanlığının resmi verilerine göre; Türkiye’deepideminin başladığı 1985 yılından 30 Kasım 2020’ye kadar 25809 HIV pozitif ve 1985 kazanılmış immünyetmezlik sendromu [Acquired Immun Deficiency Syndrome (AIDS)] olgusu bildirilmiştir. Enfeksiyonunbulaşma yollarına yönelik alınan ciddi önlemlerin bir sonucu olarak dünyanın birçok bölgesinde yenitespit edilen olgu sayısında azalma görülmesine rağmen, ülkemizde olgu sayısındaki artış halen devametmektedir. Enfeksiyonun tanısında raporlandırma süresini kısaltarak tedaviye en kısa sürede başlanabilmesiepideminin kontrolünde kritik öneme sahiptir. Bu amaçla; Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezi [Centersfor Diseases Control and Prevention (CDC)] 2010 yılında, doğrulama testi olarak yıllardır kullanılanwestern blot yerine Geenius™ HIV ½ antikor ayırt edici hızlı doğrulama testinin kullanımını öneren yenibir test algoritması yayımlamıştır. Bu çalışmada; HIV tanısında Geenius™ ve INNO-LIA testlerinin tanısal performanslarının değerlendirilmesi ve yeni HIV algoritmasına geçiş sürecinin ilk yılında Ulusal HIV-AIDSDoğrulama ve Viral Hepatitler Referans Laboratuvarının deneyiminin paylaşılması amaçlanmıştır. Çalışmayaanti-HIV pozitifliği saptanan ve doğrulama için Ulusal HIV-AIDS Doğrulama ve Viral Hepatitler ReferansLaboratuvarına gönderilen toplam 2090 hasta örneği dahil edilmiştir. Tüm örnekler laboratuvarımızdadördüncü kuşak “Enzyme Linked Immunsorbent Assay (ELISA)” testi (VIDAS® HIV-1/2 Duo Ultra assay,BioMerieux, Fransa), HIV 1/2 antikor ayırt edici hızlı doğrulama testi (Geenius™ HIV 1/2 confirmatoryassay, BioRad, Redmond, WA, ABD) ve Line-immunoassay (INNO-LIA HIV ½ Score, Fujirebio, Belçika) iletest edilmiştir. Doğrulama testleri ile indeterminant/negatif sonuç alınması veya testler arasında uyumsuzsonuç izlenmesi durumunda örnekler HIV-1 RNA revers transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR)(artus HI Virus-1 RT-PCR, Qiagen, Almanya) testi ve ‘in house’ HIV-2 RNA PCR ve HIV-2 proviral DNA PCRtestleri ile değerlendirilmiştir. Tüm testlerin duyarlılık, özgüllük değerleri ve testler arasındaki uyum karşılaştırılmıştır.Testler arası uyumun değerlendirilmesinde Cohen’s Kappa analizi kullanılmıştır. Geenius™ veberaberinde HIV-1 RNA testinin kullanımının önerildiği yeni algoritmaya göre; 1707 (%81.7) örnek HIV-1pozitif olarak tanımlanmıştır. Bu örneklerin %95.9’u Geenius™, %95.02’si ise INNO-LIA testleri ile HIV-1pozitif olarak saptanmıştır. Ancak, HIV pozitif örneklerin %2.5’i Geenius™ ve %3.5’i INNO-LIA ile negatif;%1.5’i Geenius™ ile %1.4’ü ise INNO-LIA ile HIV-1 indeterminant olarak saptanmıştır. ELISA pozitifliğitespit edilen örneklerin tümü değerlendirmeye alındığında; örneklerin %1.3’ü Geenius™ ile %2.4’ü iseINNO-LIA testi ile indeterminant olarak belirlenmiştir. INNO-LIA testi ile karşılaştırıldığında; Geenius™ testininduyarlılık, özgüllük, pozitif prediktif ve negatif prediktif değerleri sırasıyla; %99.7, %96.1, %98.9 ve%99.1 olarak saptanmıştır. INNO-LIA ve Geenius™ testleri arasındaki uyumun ise %98.95 (κ= 0.969; çokiyi) olduğu tespit edilmiştir. Doğrulamada Geenius™ ve HIV PCR testleri beraber değerlendirildiğinde; tekbaşına Geenius™ ve INNO-LIA testlerinin duyarlılığı %99.8 ve %98.3, özgüllüğü %89.8 ve %85.3 olarakbelirlenmiştir. Toplam yedi örnekte HIV-2’ye spesifik gp36 veya gp140 bantlarında silik pozitiflik izlenmişancak örneklerin dilüsyonu sonrasında pozitiflik kaybolmuş ve örneklerde HIV-2 RNA ve proviral DNAsaptanmaması nedeniyle elde edilen sonuçlar hatalı pozitiflik olarak tanımlanmıştır. Elde edilen bulgularGeenius™ ve INNO-LIA testlerinin uyumlarının mükemmel olduğu, hızlı ve güvenilir sonuçlar nedeniyleGeenius™ testinin doğrulamada güvenle kullanılabileceğini göstermektedir. HIV tanısında yapılan güncellemelerintemel nedeni olan akut HIV olgularının hızlı ve erken dönemde tespit edilebilmesi için tümHIV doğrulama merkezlerinde mutlaka HIV-1 RNA testi yapılması gerekmektedir.
Abstract
Shortly after the first detection of human immundeficiency virus (HIV) infection in USA in 1981, the number of cases have increased gradually from all around the world. Turkey’s high capacity for tourism and the unique geographic location extending between Europe and Asia, provides convenience for the passage of individuals across the countries and sexually transmitted infections including HIV, as well. According to the official data of the Ministry of Health; there are 25809 HIV positive and 1958 AIDS cases as of November 30, 2020, after the epidemic started in 1985 in Turkey. Despite the decrease in the number of newly detected HIV cases as a result of serious measures taken for the transmission of infection worldwide, the increase in the number of cases still continues in our country. Shortening the reporting period and starting treatment as soon as possible in the diagnosis of infection is critical for the control of the epidemic. For this purpose, Centers for Disease Control and Prevention (CDC) published a new test algorithm in 2010, which suggested the use of the Geenius™ HIV ½ supplemental assay test instead of western blot tests, which have been used for many years to verify HIV screening test positivity. In this study, we aimed to report the experience of the National HIV-Acquiner Immundeficiency Syndrome (AIDS) and Viral Hepatitis Reference Laboratories of Turkey in the first year of transition to the new HIV algorithm and to evaluate the diagnostic performance of Geenius™ HIV ½ and line immunassay (LIA) s. A total of 2090 anti-HIV positive patient sera sent to National HIV-AIDS and Viral Hepatitis Reference Laboratories of Turkey, Ankara for HIV confirmation were included in the study. All samples were retested with a fourth-generation enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) test (VIDAS® HIV-1/2 Duo Ultra assay, BioMerieux, France) followed by the confirmatory tests; Geenius™ HIV 1/2 confirmatory assay (BioRad, Redmond, WA) and Line-immunoassay (INNO-LIA HIV ½ Score, Fujirebio, Belgium). Indeterminate/ negative test results or discrepancies between the confirmatory tests were resolved with HIV-1 RNA reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) (artus HI Virus-1 RT-PCR, Qiagen, Germany) test and in-house HIV-2 RNA and proviral DNA PCR. The sensitivity, specificity, and the agreement of the each assay were compared. Cohen’s Kappa analysis was used for the evaluation of the agreement between the tests. According to the new algorithm which recommended Geenius™ test besides HIV-1 RNA test, 1707 (81.7%) HIV-1 positive samples were identified. Of these samples; 95.9% and 95.02% were identified as HIV-1 positive by GeeniusTM and INNO-LIA, respectively. However, 2.5% of the positive samples were negative with Geenius™ and 3.5% with INNO-LIA. One and a half percentage (1.5%) of these samples were detected with Geenius™ and 1.4% with INNO-LIA as indeterminant. When all the positive samples determined with ELISA were evaluated; it was detected that,1.3% were indeterminate by Geenius™ test and 2.4% by the INNO-LIA test. When the INNO-LIA test was regarded as the gold standard method; sensitivity, specificity, positive predictive and negative predictive values of the Geenius™ test were as follows; 99.7%, 96.1%, 98.9%, and 99.1%. The agreement between INNO-LIA and Geenius™ tests was found to be 98.95% (κ= 0.969; very good). When the Geenius™ and HIV-1 PCR tests were evaluated together for the confirmation; the sensitivities of Geenius™ and INNO-LIA tests were 99.8% and 98.3%, specificities were 89.8% and 85.3%, respectively. Slight positive bands were detected in the gp36 or gp140 bands, the HIV-2 specific envelope proteins, were detected in seven samples, However, the positivity disappeared after the dilution of the samples and it was accepted as false positivite reaction due to the absence of HIV-2 RNA and proviral DNA in these samples. In conclusion; we concluded that Geenius ™ and INNO-LIA tests have a perfect agreement in HIV diagnosis and due to the rapid and reliable results provided for the HIV test protocol, Geenius™ test can be used safely as an alternative to the immunoblot tests. HIV-1 RNA testing must be performed in all HIV confirmation centers in order to detect acute HIV cases in the fast and early period which are the main reason for the updates in HIV diagnosis.