Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2004 / Cilt: 38 - Sayı: 3
Yeni bir T-klonlama vektör sistemi
- Sayfa
- 239–243
- DOI
- —
Özet
Klonlama vektörlerinin kullanımı moleküler biyolojide devrim yaratmıştır. Uygun klonlama bölgeleri bulunan bir vektör, DNA'nın bir bölümünü klonlamak amacıyla kullanılabilir. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), klonlanması planlanan DNA parçalarını çoğaltan yararlı bir yöntemdir. Taq polimeraz çoğaltma amacıyla kullanıldığında, enzim zincir sentezi sonunda DNA'dan düşerken, kalıp DNA'dan bağımsız olarak 3' ucuna bir deoksiadenozin (A) eklemektedir. T-klonlama vektörlerinde klonlama bölgesinde zincirlerin ucunda timidin (T) çıkıntıları bulunduğundan, PCR ürünleri bunlara A-T ilişkisi ile kolayca bağlanır. Bu çalışmada, ekspresyon bölgesinde birbirinden sadece bir ve iki nükleotit farklı Xa 1, 2 ve 3 plazmid vektörleri kullanılarak, doğru ekspresyon çerçevesine oturtmayı garanti eden bir T-klonlama vektör sisteminin hazırlanması amaçlanmıştır. Bu yöntem, aynı zamanda doğru çerçeveye oturmayı sağlayan, PCR ürünlerini klonlamada kullanılan kolay bir yöntemdir.
Abstract
The use of cloning vectors has revolutionized molecular biology. Any vector with appropriate cloning sites can be used to clone a section of DNA and polymerase chain reaction (PCR) is a useful method for producing DNA fragments that are intended to be cloned. When Taq polymerase is used in PCR for polymerization, the enzyme adds an extra adenosyl (A) nucleotide to the 3' end of the extended strand, in a template independent manner. T-cloning vectors are created by adding a thymidine (T) residue to the ends of the cloning site. This aids ligation with PCR products possessing A-T. In this study, we prepared a T-cloning vector system, which guarantees insertion of open reading frames to the right position for expression. This method provides an easy way of cloning PCR products assuring at the same time in frame insertion.