Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2019 / Cilt: 53 - Sayı: 3
Kolistinin Gram-negatif Bakterilere İn Vitro Etkinliğinin Belirlenmesinde BD Phoenix100 Sistemi ve Kolistin Sıvı Disk Elüsyon Yöntemlerinin Değerlendirilmesi
- Sayfa
- 254–261
- DOI
- —
Özet
Çok ilaca dirençli gram-negatif bakterilerle oluşan enfeksiyonlar, özellikle sağlık kuruluşlarında giderek artan bir sorundur. Kolistin, tedavi seçeneklerinin sınırlı olduğu bu tür enfeksiyonlar için son seçenek antibiyotiklerden biridir. Kolistine karşı direncin artması küresel bir sorundur. Kolistin duyarlılığının belirlenmesinde “Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)” ve “European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST)” ortak çalışma grubu referans yöntem olarak, ISO-standart sıvı mikrodilüsyon yöntemini (20776-1) önermiştir. Sıvı mikrodilüsyon yöntemi pratik bir yöntem olmadığı için rutin klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarında tercih edilmemektedir; rutin mikrobiyoloji laboratuvarlarında kolistin direncinin belirlenmesi için henüz basit ve doğru fenotipik saptama yöntemleri kesin olarak tanımlanmamıştır. Çalışmamızda kolistinin gram-negatif bakterilere in vitro etkinliğinin belirlenmesinde BD Phoenix100 (Becton Dickinson, ABD) sistemi ve kolistin sıvı disk elüsyon yöntemlerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Hastanemizde 2016-2018 yılları arasında çeşitli klinik örneklerden izole edilen, 199 Klebsiella pneumoniae, 163 Acinetobacter baumannii, 34 Escherichia coli, 20 Enterobacter spp. ve üç Citrobacter spp. olmak üzere toplam 419 gram-negatif bakteri izolatı çalışmaya alınmıştır. Sıvı mikrodilüsyon yöntemi referans yöntem olarak kullanılmıştır ve ISO-standart sıvı mikrodilüsyon yöntemi (20776-1) ve CLSI/EUCAST önerilerine göre çalışılmıştır. Kolistin sıvı disk elüsyon yöntemi uygulaması sırasında her izolat için disk eklenmemiş bir adet ve sırasıyla 1, 2 ve 4 adet 10 μg’lık kolistin diski eklenmiş üç adet olmak üzere toplam dört adet 10 ml katyon eklenmiş Mueller Hinton sıvı besiyeri içeren tüp hazırlanarak, 0 (üreme kontrol), 1, 2 ve 4 μg/ml son konsantrasyonlar elde edilmiştir. Oda sıcaklığında 30 dakika inkübasyondan sonra her tüpe 50 μl bakteri süspansiyonu eklenmiştir. 35°C’de 16-20 saat inkübasyon sonrası minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) değerleri gözle değerlendirilmiştir. BD Phoenix100 sistemi için üretici firmanın önerileri izlenmiştir. Sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile kolistin sıvı disk elüsyon yöntemi arasındaki kategorik uyum %99.3, çok büyük hata oranı ve büyük hata oranı sırasıyla %0.2 ve %0.5 olarak saptanmıştır. BD Phoenix100 sistemi ile kategorik uyum %95, çok büyük hata oranı %5 olarak saptanmıştır. Sonuçlarımız kolistin sıvı disk elüsyon yönteminin, referans sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile karşılaştırıldığında performansının iyi olduğunu göstermiştir. Çok büyük hata oranı yüksek olan BD Phoenix100 sistemi ise, kolistine dirençli ve kolistine duyarlı izolatları güvenilir bir şekilde ayırt etmemektedir.
Abstract
Infections with multidrug resistant gram-negative bacteria is a growing problem especially in health care settings. Colistin is one of the last resort antibiotics for such infections in which treatment options are limited. Increasing resistance to colistin is a global problem. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) and the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) study groups have recommended the ISO-standard broth microdilution method (20776-1) as the reference method for the determination of colistin susceptibility. Since the broth microdilution method is not a practical method, it is rarely used in routine clinical microbiology laboratories, yet simple and accurate phenotypic detection methods for the determination of colistin resistance in routine microbiology laboratories are not precisely defined. The aim of this study was to evaluate BD Phoenix100 (Becton Dickinson, USA) system and colistin broth disk elution method for the detection of in vitro activity of colistin against gram-negative bacteria. A total of 419 gram-negative bacteria, including 199 Klebsiella pneumoniae, 163 Acinetobacter baumannii, 34 Escherichia coli, 20 Enterobacter spp., and three Citrobacter spp. isolates which were isolated from various clinical samples in our hospital between 2016-2018 were tested. The broth microdilution method was used as the reference method applying ISO-standard broth microdilution methods (20776-1) and CLSI/EUCAST recommendations. For colistin broth disk elution method, final concentrations of 0 (growth control), 1, 2 and 4 μg/ml were obtained by adding 10 μg colistin disks to four tubes containing 10 ml cation-adjusted Mueller Hinton broth per isolate. After incubation at room temperature for 30 minutes, 50 μl of standardized inoculum suspensions were added to the tubes. Colistin minimum inhibitor concentration (MIC) values were read visually after 16-20 hours of incubation at 35°C in ambient air. Manufacturer’s recommendations were followed for BD Phoenix100 system. The categorical agreement between the reference broth microdilution method and the colistin broth disk elution method was 99.3%, very major error and major error rates were 0.2% and 0.5%, respectively. For BD Phoenix100 system, the categorical agreement was 95%, with a very major error rate of 5%. Our results showed that colistin broth disc elution method worked well compared to the reference broth microdilution method. The BD Phoenix100 system, with a high very major error rate, does not reliably distinguish colistin-resistant and colistin-susceptible strains.