Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2001 / Cilt: 35 - Sayı: 1
Hepatit B virüs yüzey antijenin saptanmasına yönelik ELISA tanı kiti yapılması ve değerlendirilmesi
- Sayfa
- 115–125
- DOI
- —
Özet
Bu çalışmada hepatit B virüs yüzey antijeninin (HBsAg) belirlenmesine yönelik niteliksel bir HBsAg-ELISA kiti geliştirilmiştir. Bu amaçla, laboratuvarımızda daha önce hibridoma hücrelerinden üretilmiş olan ve HBsAg ile ilişkili gruba özgül "a" epitopunu tanıyan anti-HBs IgM ve anti-HBs lgG1 monoklonal antikorları (mAb) kullanılmıştır. Yüksek bağlama kapasiteli, 96 çukur içeren düz tabanlı mikroplaklar anti-HBs IgM ile kaplanmış, serum örneklerinin inkübasyonu sonrasında çukurlara anti-HBs lgG1 eklenmiştir. Anti-HBs IgM - HBsAg - anti-HBs lgG1 kompleksi ise peroksidaz işaretli anti-fare IgG antikorları kullanılarak saptanmıştır. Bu yöntem ile, ticari bir kemilüminesan yöntem sonunda HBsAg pozitif olarak saptanan 228 ye negatif saptanan 72 serum örneği test edilerek karşılaştırılmıştır. Sonuç olarak, laboratuvarımızda hazırlanan HBsAg-ELISA kitinin tanısal duyarlılığının %96.5, tanısal özgüllüğünün ise %100 olduğu belirlenmiştir. Dolayısıyla, uyguladığımız HBsAg-ELISA kitinin duyarlılık oranı yükseltildikten sonra serolojik tanı amacıyla kullanılabileceği öngörülmektedir.
Abstract
In this study, the production and evaluation of a qualitative home-made ELISA kit for the detection of hepatitis B virus surface antigen (HBsAg), have been aimed. For this purpose, anti-HBs IgM and anti-HBs lgG1 monoclonal antibodies (mAb) secreted by hybridoma cells grown in our laboratory which recognize HBsAg related group specific "a" epitope, were used. High binding capacity, fiat bottomed 96 well microtiter plates were coated with anti-HBs IgM to capture HBsAg, incubated with serum samples and anti-HBs lgG1 was added into the wells. Consequently, anti-HBs IgM - HBsAg - anti-HBs lgG1 complex was detected by peroxidase-labeled anti-mouse IgG antibodies. By using our home-made ELISA kit, 228 HBsAg positive and 72 HBsAg negative serum samples, characterized by a chemiluminescence-based commercial method, were re-tested and the results were compared. The sensitivity and specificity of our kit were found to be 96.5% and 100% respectively. As a result, it was predicted that this HBsAg-ELISA kit could be used for serologic diagnosis after an improvement in its diagnostic sensitivity.