Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2011 / Cilt: 45 - Sayı: 2
Deneysel Pulmoner Aspergilloz Modelinde İnterlökin-10, Tümör Nekroz Faktörü-alfa ve İnterferon-gama İfadelenmesinin Araştırılması
- Sayfa
- 344–352
- DOI
- —
Özet
Pulmoner aspergilloz, özellikle nötropenik hastalarda görülen önemli bir fırsatçı enfeksiyon olup, en sık Aspergillus fumigatus tarafından oluşturulmaktadır. Enfeksiyonun patogenezi tam olarak açıklık kazanmamış olmakla birlikte, temel mekanizmanın hücresel bağışıklık ve sitokin yanıtı olduğu belirtilmektedir. Bu çalışmada, deneysel olarak pulmoner aspergilloz oluşturulan sıçanların akciğer dokularında bölgesel sitokin üretiminin ters transkriptaz-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile araştırılması amaçlanmıştır. Deney Hayvanları Etik Kurulu onayı ile gerçekleştirilen çalışmada, Wistar albino cinsi 33 adet dişi sıçan kullanılmış; deneklerden 25’i intratrakeal yolla A.fumigatus ile enfekte edilirken, sekizi kontrol olarak ayrılmıştır. Enfekte sıçanların akciğer dokularında A.fumigatus varlığı, kantitatif kültür ve histolojik boyama ile doğrulanmıştır. Hasta ve kontrol grubundaki deneklerin akciğer doku örneklerinden RNA izolasyonu ticari bir kit ile (Qiagen, Almanya) yapılmıştır. Genomik RNA’dan komplementer DNA eldesi gerçekleştirildikten sonra interlökin-10 (IL-10), tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-α) ve interferon gama (IFN-γ) sitokinlerine özgül primerler (Tıb Molbiol, Almanya) kullanılarak, “in-house” kalitatif ve kantitatif (gerçek zamanlı) PCR yöntemleri uygulanmış ve hedef bölgeler çoğaltılmıştır. Gerçek zamanlı PCR ile IL-10, TNF-α ve IFN-γ için elde edilen ortalama mRNA düzeyleri aspergillozlu grupta sırasıyla; 6.5 x 106 kopya/ml, 7.9 x 105 kopya/ml ve 2.2 x 103 kopya/ml olarak bulunurken, bu değerler kontrol grubunda sırasıyla; 4.3 x 102 kopya/ml, 5.6 x 103 kopya/ml ve 1.3 x 102 kopya/ml olarak hesaplanmıştır. Çalışmamızda, aspergilloz sıçan modelinde IL-10 ve TNF-α mRNA ifadelenmesinin kontrol grubuna göre anlamlı düzeyde farklı olduğu (p< 0.05), IFN-γ mRNA ifadelenmesinin ise gruplar arasında farklılık göstermediği (p= 0.53) saptanmıştır. Bu verilere göre, proinflamatuvar sitokinlerin yapımı ile fagositer hücrelerin bu bölgeye göçü arasında ilişki olabileceği düşünülmüştür. Akciğer dokusunda TNF-α ve IL-10 sitokin yapımının yüksek düzeyde olması, bölgesel doku yıkımının sınırlandırılmasında etkili olsa da, enfeksiyonun ortadan kaldırılmasında genellikle yetersiz kalındığını da işaret etmektedir.
Abstract
Pulmonary aspergillosis which is an important opportunistic infection in neutropenic patients, is usually caused by Aspergillus fumigatus. Since the pathogenesis of disease is not well understood, the main proposed mechanism is thought to be cell-mediated immunity and cytokine response. The aim of this study was to investigate the local production of cytokines in the lung tissues of rats with experimentally developed aspergillosis, by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). A total of 33 Wistar albino type rats were included in the study with the consent of Experimental Animal Ethics Committee. Twenty-five of the rats were infected with A.fumigatus by intratracheal way, while 8 animals were used as controls. The presence of A.fumigatus in the lung tissues of infected rats was confirmed with the use of quantitative culture and histologic staining methods. RNA isolation from the lung tissue samples of both groups were performed by a commercial kit (Qiagen, Germany). After obtaining complementary DNAs from the genomic RNAs, in-house qualitative and quantitative (real-time) PCR methods were used to amplify the target regions for interleukin-10 (IL-10), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interferon-gamma (IFN-γ) by using specific primers (Tıb Molbiol, Germany). Mean mRNA levels achieved by real-time PCR for IL-10, TNF-α and IFN-γ in aspergillosis group were 6.5 x 106 copies/ml, 7.9 x 105 copies/ml and 2.2 x 103 copies/ml, respectively, while those values in control group were 4.3 x 102 copies/ml, 5.6 x 103 copies/ml and 1.3 x 102 copies/ml, respectively. Our data indicated that rat model of aspergillosis was associated with significantly increased expression of mRNA encoding IL-10 and TNF-α than controls (p< 0.05), however there was no statistically significant difference between the groups with respect to IFN-γ expression (p= 0.53). In conclusion, the production of proinflammatory cytokines which mediate the influx of phagocytic cells might account for the localization of Aspergillus infection to the upper respiratory tract. The up-regulation of the expression of the immunomodulatory cytokine TNF-α and IL-10 in lung tissue from infected rats might be important to limit the extent of local tissue destruction, but might also account for the fact that infected rats are generally unable to clear the infection spontaneously.