Kan kültürlerinden izole edilen candıda spp. suşlarının antifungal ilaçlara karşı duyarlılıklarının belirlenmesinde buyyon mikrodilüsyon ile E-test yöntemlerinin karşılaştırılması

Comparison of broth microdilution and E-test methods for the antifungal susceptibility testing of candida spp. strains isolated from blood cultures

Özet

Son yıllarda, immünsüpresif tedavi alan hasta sayısındaki artışa bağlı olarak, ciddi fungal enfeksiyon- ların, özellikle invazif Candida enfeksiyonlarının insidansında da artış gözlenmekte ve bu durum da anti- fungal ajanlara karşı direnç oranlarında belirgin artışı beraberinde getirmektedir. Bu çalışmada, kan kül- türlerinden izole edilen Candida spp. suşlarının amfoterisin B, flukonazol, vorikonazol ve kaspofungine karşı duyarlılıklarının belirlenmesinde, E-test yönteminin standart buyyon mikrodilüsyon (BMD) yöntemi ile karşılaştırılması amaçlanmıştır. Çalışmaya, Ocak 2006-Aralık 2007 tarihleri arasında kan kültürlerinden (BACTEC 9000; Becton-Dickinson, ABD) izole edilen ve konvansiyonel yöntemler ve API 20C AUX (Bi- oMerieux, Fransa) sistemi ile tanımlanan toplam 46 Candida suşu (23 C.albicans, 10 C.parapsilosis, 5 C.tropicalis, 3 C.krusei, 2 C.famata, 1 C.glabrata, 1 C.guilliermondii, 1 C.kefyr) alınmıştır. İzolatların antifun- gal duyarlılıkları, “Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, M27-A3)” tarafından tanımlanan BMD yöntemi ve E-test ile belirlenmiştir. Çalışmaya dahil edilen izolatlardan ikisi (C.albicans ve C.glabra- ta) E-test ile flukonazole dirençli; BMD ile duyarlı saptanmıştır. E-test ile kaspofungin minimum inhibitör konsantrasyonu (MİK) değerleri, C.parapsilosis suşlarında diğer Candida türlerine kıyasla daha yüksek (MİK= 1-2 µg/ml) bulunmuştur. Vorikonazole karşı sadece bir C.albicans izolatı E-test ile dirençli (MİK= 4 µg/ml), BMD ile ise duyarlı (MİK= 0.08 µg/ml) olarak saptanmıştır. Amfoterisin B için kesinleşmiş direnç sınırı olmadığından yöntemlerin karşılaştırılmasında MİK değerleri dikkate alınmış ve tüm izolatların am- foterisin B için her iki yöntemle de aynı düşük MİK aralıklarına (< 0.002-0.5) sahip olduğu izlenmiştir. E- test yöntemi ile elde edilen MİK değerleri, standart BMD sonuçlarıyla karşılaştırıldığında, flukonazol için %80.4; amfoterisin B için %84.7; vorikonazol için %93.4 ve kaspofungin için %95.6 uyum olduğu belir- lenmiştir. Sonuç olarak çalışmamızda, kan kültürlerinden en sık izole edilen Candida türünün C.albicans olduğu, bunu C.parapsilosis‘in izlediği ve izolatların antifungal direnç oranlarının oldukça düşük olduğu saptanmıştır. Bununla birlikte, özellikle yeni antifungal ajanlar olan vorikonazol ve kaspofungine karşı du- yarlılık değerlendirildiğinde, flukonazol ve amfoterisin B’ye kıyasla, her iki yöntem arasındaki uyumun %90’ın üzerinde olması umut verici bir sonuç olarak yorumlanmıştır.

Abstract

The incidence of serious fungal infections, particularly invasive Candida infections exhibit an incre- asing trend in the last decades since the number of patients receiving immunosuppressive treatment is increasing. This situation eventually results in an increment in resistance to antifungal agents. The aim of this study was to compare the standard broth microdilution (BMD) and E-test methods for antifungal susceptibility testing of Candida species isolated from blood cultures in our hospital, against fluconazo- le, voriconazole, caspofungin and amphotericin B. A total of 46 Candida strains isolated from the blood cultures by BACTEC 9000 (Becton Dickinson, USA) and identified by conventional techniques and API 20C AUX (BioMerieux, France) during January 2006-December 2007, were included into this study. The identification results of the isolates were as follows: C.albicans (23), C.parapsilosis (10), C.tropicalis (5), C.krusei (3), C.famata (2), C.glabrata (1), C.guilliermondii (1), C.kefyr (1). The antifungal susceptibilities were determined by BMD method described in Clinical and Laboratory Standards Institute M27-A3 do- cument and E-test. Only two isolates (C.albicans and C.glabrata) were found to be resistant to flucona- zole with E-test but susceptible with BMD. The minimal inhibitory concentration (MIC) values of caspo- fungin were higher (MIC= 1-2 µg/ml) in C.parapsilosis compared to other Candida species using E-test. Only one C.albicans was resistant to voriconazole by E-test (MIC= 4 µg/ml), but it was susceptible by BMD (MIC= 0.08 µg/ml). Since definite resistance breakpoints do not yet exist for amphotericin B, MIC values were considered for amphotericin B and it was found that all strains had identical low MIC valu- es (< 0.002-0.5). When E-test results were compared with the standard BMD results, MIC values were in agreement 80.4% for fluconazole, 84.7% for amphotericin B, 95.6% for voriconazole and 93.4% for cas- pofungin. These results indicated that the most frequently isolated Candida species among blood cultu- res was C.albicans, followed by C.parapsilosis and these isolates had low antifungal resistance rates. When voriconazol and caspofungin susceptibilities were considered, both E-test and BMD susceptibility results were in good aggreement in comparison to fluconazol and amphotericin B. E-test can be considered as a compatible method for the antifungal susceptibility testing of Candida species compared to standard broth microdilution method.