Klinik mikrobiyoloji laboratuvarında sıklıkla atlanan bir etken: Arcanobacterium haemolyticum

A frequently overlooked Bacteria in clinical microbiology laboratories: Arcanobacterium haemolyticum

Özet

Önceden Corynebacterium haemolyticum olarak bilinen Arcanobacterium haemolyticum, fakültatif anaerop, katalaz negatif, CAMP inhibisyon testi pozitif, gram-pozitif bir basildir. Bu bakteri, genellikle çocuk ve genç erişkinlerde farenjite neden olmakta ve akut farenjitlerin %0.5-3’ünden sorumlu olduğu tahmin edilmektedir. A.haemolyticum’un hemolitik aktivitesinin koyun kanlı besiyerinde yavaş olması, üremesinin flora bakterileri tarafından baskılanması ve koloni morfolojisinin beta-hemolitik streptokoklar ile karışması nedeniyle, rutin yöntemlerle incelenen boğaz kültürlerinde genellikle göz ardı edilmektedir. Bu çalışmada, çocuk hastalara ait boğaz kültürlerinde, koyun ve insan kanlı besiyerleri kullanılarak A.haemolyticum sıklığının araştırılması ve besiyerlerinin A.haemolyticum tanısındaki etkinliğinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada, Mart-Temmuz 2010 tarihleri arasında hastanemizin pediatri polikliniklerine başvuran ve tonsillofarenjit bulguları olan 355 hastadan (median yaş: 7 yıl) alınan boğaz kültürleri değerlendirilmiştir. Tonsiller ve posterior orofarenksten alınan sürüntü örnekleri, yarısı %5 koyun kanı diğer yarısı da %5 insan kanı içeren iki bölmeli besiyerine ekilmiş; kültürler %5 CO2’li ortamda 37°C’de inkübe edilmiş ve 24, 48 ve 72. saatlerde beta-hemoliz yapan ve mikroskobik incelemede gram-pozitif basil morfolojisinde görülen koloniler ileri incelemeye alınmıştır. A.haemolyticum tanısı, katalaz testinin negatif, ters CAMP testinin pozitif olmasına ve API-Coryne (bioMérieux, Fransa) tanımlama testi ile saptanan biyokimyasal özelliklerine göre konulmuştur. Çalışmamızda, 56 (%16) hastaya ait boğaz kültüründe beta-hemoliz oluşturan koloniler saptanmış ve bunların %14 (49/355)’ü beta-hemolitik streptokok (46 A grubu, 2 G grubu, 1 C grubu), %2 (7/355)’si ise A.haemolyticum olarak tanımlanmıştır. A.haemolyticum izolatlarının tümü 24. saatte insan kanlı agarda beta-hemoliz oluşturması sonucu tanımlanmış; koyun kanlı agarda beta-hemoliz oluşumu ise dört suş için 48. saatte ve üç suş için 72. saatte gerçekleşmiştir. Sonuç olarak, ilkbahar/yaz dönemindeki beş aylık süre içinde tonsillofarenjitli çocuk hastaların boğaz kültürlerinde A.haemolyticum saptanma oranı %2 olarak belirlenmiş ve suşların tümü 24. saatte insan kanlı agardan izole edilmiştir. Dolayısıyla, mikrobiyoloji laboratuvarlarında rutin boğaz kültürlerinin değerlendirilmesinde A.haemolyticum’um atlanmaması için, aynı veya farklı petrilerde koyun kanlı besiyeri ile beraber insan kanlı besiyerinin de kullanılmasının yararlı olacağı düşünülmüştür.

Abstract

Arcanobacterium haemolyticum, previously known as Corynebacterium haemolyticum, is a facultative anaerobic, gram-positive bacillus with negative catalase and positive CAMP inhibition test results. It may be the causative agent of about 0.5-3% of acute bacterial pharyngitis especially in children and young adults. Since growth of A.haemolyticum is usually inhibited by flora members and since it slowly develops hemolysis in sheep blood agar and its colony morphology resembles beta-hemolytic streptococci, it is frequently overlooked in the evaluation of throat cultures. The aims of this study were to investigate the isolation frequency of A.haemolyticum from the throat cultures of pediatric patients by using both sheep and human blood agar media, and to evaluate the performances of those media for the identification of A.haemolyticum. A total of 355 patients (median age: 7 years) who were admitted to pediatric outpatient clinics with the symptoms of tonsillopharyngitis between March-July 2010 period, were included in the study. Swab samples obtained from tonsils and posterior oropharynx were inoculated into a divided plate which contained 5% sheep blood agar in one half and 5% human blood agar in the other half. After incubation in 5% CO2 at 37°C, the beta-hemolytic colonies with a microscopic morphology of gram-positive bacilli were further evaluated on 24, 48 and 72th hours. Identification of A.haemolyticum was based on negative catalase test, positive reverse CAMP test and biochemical characteristics obtained by API-Coryne (bioMérieux, France) identification system. In our study, beta-hemolytic colonies were detected in the throat cultures of 56 (16%) patients, of which 14% (49/355) were identified as beta-hemolytic streptococci (46 group A, 2 group G, 1 group C), and 2% (7/355) were identified as A.haemolyticum. All of the A.haemolyticum isolates were characterized by the production of beta-hemolysis in human blood agar at 24 hours, while the beta-hemolysis generation time in sheep blood agar was 48 hours for four isolates and 72 hours for three isolates. A.haemolyticum was identified in 2% of children with tonsillopharyngitis during the five months study period in spring/summer. All of the strains were isolated at human blood agar in 24 hours. Thus, in order to isolate A.haemolyticum in routine throat cultures, sheep blood agar plates together with human blood agar plates should be used in clinical microbiology laboratories.