Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2012 / Cilt: 46 - Sayı: 2
Kan izolatı E.coli ve K.pneumoniae suşlarında genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz, KPC-tip karbapenemaz ve plazmid aracılı AmpC beta-laktamaz varlığının araştırılması
- Sayfa
- 159–169
- DOI
- —
Özet
Bu çalışma; ciddi enfeksiyonlara neden olan kan izolatı Escherichia coli ve Klebsiella pneumoniaeda görülen genişlemiş spektrumlu beta-laktamazlar (GSBL) ile son yıllarda artış gösteren plazmid kaynaklı AmpC (pAmpC) beta-laktamazlar ve KPC-tip karbapenemazın varlıklarını araştırmak amacıyla yapılmıştır. Ocak 2001-Mart 2009 tarihleri arasında Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi İhsan Doğramacı Çocuk Hastalıkları Hastanesine başvuran hastaların kan örneklerinden izole edilen 99 E.coli ve 114 K.pneumoniae su-şu çalışmaya alınmıştır. GSBL, pAmpC beta-laktamaz ve KPC-tip karbapenemaz enzimleri için tarama testleri aynı plakta uygulanmıştır. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) önerileri doğrultusunda doğrulama testi olarak GSBL için kombine disk yöntemi, KPC-tip karbapenemaz için modifiye Hod- ge testi, ayrıca KPC-tip karbapenemaz, pAmpC beta-laktamaz için boronik asitli inhibisyon test yöntemi ve pAmpC beta-laktamazlar için modifiye Hodge testi uygulanmıştır. Her üç tip direncin birarada bulunabilmesi durumunda ortaya çıkacak direnç fenotipinin belirlenmesinde boronik asitli inhibisyon test yöntemi uygulanmıştır. E.coli ve K.pneumoniae suşlarında beta-laktamaz oranları sırasıyla GSBL için %26.2 (26/99) ve %61.4 (70/114); pAmpC için %1 (1/99) ve %0.9 (1/114); GSBL + pAmpC için %6 (6/99) ve %3.5 (4/114) olarak tespit edilmiştir. Bir suşta GSBLnin maskelenmiş olduğu saptanmıştır. KPC-tip karbapenemaz için ertapeneme dirençli üç izolat (iki E.coli, bir K.pneumoniae), boronik asitli inhibisyon testi ile pozitif saptanmalarına karşın, modifiye Hodge testi ile negatif olarak bulunmuştur. CLSI önerileri doğrultusunda modifiye Hodge testi sonuçları geçerli kabul edilmiştir. Bu üç suşun GSBL ve pAmpC için de pozitif olmaları ve modifiye Hodge testi ile negatiflik göstermeleri, ertapenem direncinin başka bir mekanizmadan kaynaklanmış olduğunu düşündürmüştür. Laboratuvar açısından, pAmpC beta-laktamazların ve KPC-tip karbapenemazların rutin testlerle tanımlanabilmeleri için uygun duyarlılık test yöntemlerinin kullanılması gerekmektedir. Bu amaçla pAmpC beta-laktamaz için boronik asitli inhibisyon testi, uygulama ve yorumlanması kolay, pratik bir yöntemdir. KPC-tip karbapenemaz için ise CLSI tarafından standardize edilen modifiye Hodge testi uygun bir yöntemdir. Bu çalışmanın bulguları GSBL oranlarının alarm verecek kadar yüksek olduğunu ve pAmpC sıklığının da henüz düşük olmakla birlikte GSBL ile beraber sıklığının artmakta olduğunu göstermektedir. Bu bulgular, bu konuda acil önlem alınması gerektiğini düşündürmektedir
Abstract
The aim of this study was to investigate the presence of extended spectrum beta-lactamase (ESBL), KPC-type carbapenemase and plasmid-mediated AmpC beta-lactamase (pAmpC) which have increasedin incidence in recent years in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains isolated from the blood samples causing serious infections. Ninety nine E.coli and 114 K.pneumoniae strains which were isolated from the blood samples of patients admitted to Hacettepe University Medical Faculty, Ihsan Dogramaci Childrens Hospital between January 2001 and March 2009 were investigated. The screening tests for ESBL, pAmpC beta-lactamase and KPC-type carbapenemase were performed on the same plate. Combined disk test was performed for ESBL and modified Hodge test was done for KPC-type carbapenemase confirmation according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) guidelines. In addition the inhibitory-based test with boronic acid for KPC-type carbapenemase, pAmpC beta-lactamase and the modified Hodge test for pAmpC beta-lactamase were performed. Boronic acid inhibition test was performed to detect the co-presence of the three types of resistance. The frequency of the beta-lacta-mases in E.coli and K.pneumoniae isolates were as follows respectively: ESBL 26.2% and 61.4%; pAmpC 1% and 0.9% and ESBL + pAmpC 6% and 3.5%. ESBL was masked by pAmpC in an isolate. Ertapenem resistance was shown in three isolates and KPC-type carbapenemases were detected positive by the in- hibitory-based test with boronic acid but found to be negative by the modified Hodge test. The results of modified Hodge test was considered valid according to CLSI comments. Since both ESBL and pAmpC were positive but modified Hodge test was negative in these three strains, ertapenem resistance was att- ributed to another mechanism. For the determination of ESBL and pAmpC beta-lactamases in the routine laboratory, reliable and sensitive susceptibility tests should be performed. The inhibitory-based test with boronic acid is easy for interpretation, and a practical method for the detremination of pAmpC be-ta lactamases. For KPC-type carbapenemases modified Hodge test which has been standardized by CLSI,is a reliable method. The results of this study showed that ESBL positivity rates are alarming and altho- ugh the frequency of pAmpC is currently low, it is increasing together with ESBL. These data indicated the need for the establishment of urgent measures to control the increase in plasmid-mediated antibi- otic resistance in gram-negative enteric bacteria.