Trichosporon spp. suşlarında bazı virülans faktörlerin araştırılması

Özet

Son yıllarda, kronik hastalığı olan kişilerin yaşam süresinin uzaması, geniş spektrumlu antibiyotik kullanımı, cerrahi girişimler ve sitotoksik ilaç tedavisi uygulamalarının artmasına paralel olarak mantar enfeksiyonlarının görülme sıklığı da artmış ve önceleri kontaminant/kolonizasyon olarak değerlendirilen Trichosporon, Fusarium ve Geotrichum gibi mantarlar özellikle nötropenik hastalarda önemli morbidite ve mortalite nedeni olmaya başlamıştır. Bu çalışmanın amacı, Trichosporon türlerinde, fungal virülans faktörlerinden olan salgısal asit proteinaz, fosfolipaz, esteraz, koagülaz ve hemolitik aktivite varlığının araştırılmasıdır. Çalışmaya, 24 (%60)’ü Trichosporon asahii, 6 (%15)’sı T.inkin ve 10 (%25)’u diğer türler (birer adet olmak üzere T.aquatile, T.asteroides, T.coremiiforme, T.cutaneum, T.dermatis, T.faecale, T.japonicum, T.montevideense, T.mucoides, T.ovoides) olmak üzere toplam 40 Trichosporon suşu dahil edil- miştir. İzolatların tanımlanması; mısır unu agar besiyerinde mikroskobik morfoloji (blastospor, artrospor, klamidospor, yalancı hif ve gerçek hif) ve karbonhidrat asimilasyon testleri (API ID32C; bioMérieux, Fransa) kullanılarak yapılmıştır. Asit proteinaz aktivitesi %1’lik sığır serum albumini içeren agar ile, fos- folipaz aktivitesi yumurta sarısı içeren katı besiyeri ile, esteraz aktivitesi Tween 80 içeren katı besiyeri ile, hemolitik aktivite %5-10 koyun kanlı Sabouraud dekstroz agar ile değerlendirilmiştir. Koagülaz enzim aktivitesi ise insan ve tavşan plazmaları ile kullanılarak belirlenmiştir. Çalışmamızda, 40 Trichosporon spp. suşunun hiçbirisinde salgısal asit proteinaz ve fosfolipaz enzim aktivitesi tespit edilmemiş; buna karşın tüm Trichosporon suşlarında esteraz enzim aktivitesi pozitif olarak saptanmıştır. Hemolitik enzim aktivitesi ise, ikisi T.asahii, biri T.japonicum olmak üzere üç suşta “+++”, 12 suşta (9 T.asahii, 1 T.inkin, 1 T.asteroides, 1 T.mentevideense) “++” olmak üzere toplam 15 (%37.5) suşta pozitif olarak bulunmuştur. Hemolitik enzim aktivitesi pozitif olan 15 izolatın 11’i T.asahii olmakla birlikte, türler arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır (p> 0.05). Koagülaz enzim aktivitesi değerlendirildiğinde; insan plazması ile yapılan testlerde suşların %5 (2/40; 1 T.asahii, 1 T.inkin)’i tavşan plazması ile yapılan testlerde ise %27.5 (11/40; 9 T.asahii, 1 T.inkin, 1 T.montevideense)’i pozitif sonuç vermiştir. Çalışmamızın verileri, Trichosporon suşlarında saptanan esteraz, hemolizin ve koagülaz üretiminin, enfeksiyonların patogene- zinde rolü olabileceğini düşündürmekle birlikte, bu konu ile ilgili yapılması gereken geniş kapsamlı klinik ve mikolojik çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract

The frequency of fungal infections have increased recently in parallel to prolonged survival of patients with chronical infections, common use of the broad-spectrum antibiotics and cytotoxic drugs and surgical interventions. Fungi such as Trichosporon, Fusarium and Geotrichum that were previously evaluated as contaminant/colonization, become important causes of morbidity and mortality especially in neutropenic patients. The aim of this study was to investigate the presence of virulence factors such as acid proteinase, phospholipase, esterase, coagulase and hemolytic activity among Trichosporon species. A total of 40 Trichosporon strains, of them 24 (60%) were T.asahii, 6 (15%) were T.inkin and 10 (25%) were the other species (one of each of T.aquatile, T.asteroides, T.coremiiforme, T.cutaneum, T.dermatis, T.faecale, T.japonicum, T.montevideense, T.mucoides, T.ovoides) were included in the study. Identification of the isolates was performed according to microscopic morphology (blastospores, arthrospores, pseudohyphae and true hyphae) on corn meal agar media, and carbohydrate assimilation patterns (API ID32C; bioMérieux, France). Secretory acid proteinase, phospholipase and esterase activities of the strains were evaluated by 1% bovine serum albumin containing agar, by egg yolk containing solid medium, and by Tween 80 containing solid medium, respectively. Hemolytic activity of the isolates were evaluated by 5-10% sheep blood Sabouraud dextrose agar. Coagulase enzyme activity was determined by using human and rabbit plasma. In our study, all of the 40 Trichosporon spp. strains were found negative in terms of acid proteinase and phospholipase enzyme activity, however all were positive for esterase enzyme activity. Hemolytic enzyme activity were identified in a total of 15 (37.5%) strains, being “+++” in three strains (2 T.asahii, 1 T.japonicum), and “++” in 12 isolates (9 T.asahii, 1 T.inkin, 1 T.asteroides, 1 T.mentevideense). Although 11 of those 15 positive strains were T.asahii, there was no statistical difference between the species in terms of hemolytic enzyme activity (p> 0.05). Coagulase enzyme activity was detected in 5% (2/40; 1 T.asahii, 1 T.inkin) of the strains with human plasma and in 27.5% (11/40; 9 T.asahii, 1 T.inkin, 1 T.montevideense) with rabbit plasma. In conclusion, our data indicated that esterase, coagulase and hemolytic activities detected in Trichosporon spp. might play role in the pathogenesis of Trichosporon infections, however, further large-scaled clinical and mycological studies are needed to prove this relation.