Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2014 / Cilt: 48 - Sayı: 1
Staphylococcus aureus metisilin direncinin hızlı saptanmasında nitrat redüktaz testi: Bir sınır değer duyarlılık test yöntemi
- Sayfa
- 40–47
- DOI
- —
Özet
Metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA), toplum ve hastane kaynaklı enfeksiyonların önemli bir nedenidir. MRSA suşlarının hızlı ve doğru olarak tanımlanması, enfeksiyonun kontrolü ve bakterinin nozokomiyal yayılımını önlemek açısından büyük önem taşımaktadır. Bu çalışmada, S.aureus izolatlarında metisilin direncinin hızlı saptanması için sınır değer duyarlılık testi olarak nitrat redüktaz testi (NRT)’nin etkinliği araştırılmıştır. Çalışmaya, kültür koleksiyonumuzdan toplam 135 S.aureus klinik izolatı dahil edilmiş; suşların in vitro metisilin duyarlılığı NRT sınır değer duyarlılık testi ve sıvı mikrodilüsyon yöntemiyle araştırılmıştır. NRT sınır değer duyarlılık testi için üç tüp kullanılmış, her bir bakteriden hazırlanan 0.5 McFarland bulanıklığındaki inokulümlerden 50’şer μl bu tüplere konulmuştur. Bu işlemden sonra tüpler 35oC’de inkübe edilmiştir. Bu tüplerden biri üreme kontrolü (ilaçsız), biri test tüpü (4 mg/L sefoksitinli) ve biri liyofilize test tüpü (4 mg/L sefoksitinli) olarak kullanılmıştır. Beş saatlik inkübasyon süresinin ardın- dan taze olarak hazırlanmış ayıraçtan [2 birim %0.2 sülfanilamid, 2 birim %0.1 N-(1-naftil) etilendiamin dihidroklorür ve 1 birim konsantre hidroklorik asit] 500’er μl kontrol tüpüne eklenmiştir. Kontrol tüpünde yeterli üremenin varlığını gösteren mor/menekşe bir rengin oluşması durumunda diğer iki tüpe de aynı miktarda ayıraç ilave edilmiştir. Diğer iki test tüpünde de mor/menekşe renk değişiminin gözlendiği durumda bakterinin sefoksitine dirençli olduğu kabul edilmiştir. Ü Üreme kontrol tüpünde renk oluşumu gözlenirken, diğer iki test tüpünde renk oluşumunun gözlenmediği durumda ise bakterinin sefoksitine (dolayısıyla metisiline) duyarlı olduğuna karar verilmiştir. Test edilen 135 izolattan mecA pozitif olan 97’si hem sıvı mikrodilüsyon yöntemi hem de NRT sınır değer duyarlılık testiyle metisiline dirençli olarak sap- tanmıştır. mecA geni negatif olan 38 izolat ise her iki yöntemle de metisiline duyarlı bulunmuştur. Buna göre NRT testinin özgüllük, duyarlılık, pozitif ve negatif prediktif değerleri %100 olarak belirlenmiştir. Sonuç olarak, tüp tabanlı NRT sınır değer duyarlılık testi birçok laboratuvar için güvenilir, tekrarlanabilir ve ucuz bir yöntemdir. Ayrıca, test sisteminin liyofilize olarak hazırlanması raf ömrünü artırmakta ve bu da laboratuvarlar için ek bir avantaj sağlamaktadır.
Abstract
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is an important cause of hospital- and community- acquired infections. Therefore rapid and accurate detection of MRSA is essential for infection control and prevention of nosocomial spread. In this study, the efficacy of a nitrate reductase assay (NRA) as a breakpoint susceptibility testing method was evaluated for the rapid detection of methicillin resistance in S.aureus A total of 135 S.aureus clinical isolates from our collection were tested for methicillin susceptibility by NRA breakpoint susceptibility method and by broth microdilution method. For NRA breakpoint susceptibility testing three tubes including growth control tube (without drug), test tube (with 4 mg/L cefoxitin) and lyophilized test tube (with 4 mg/L cefoxitin) were used. 50 μl of 0.5 McFarland bacte- rial suspension of each isolate was inoculated into the tubes. All tubes were incubated at 35oC. After five-hour incubation, 500 μl of freshly prepared reagent [2 units of 0.2% sulfanilamide, 2 units of 0.1% N-(1-naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride and 1 unit of concentrated hydrochloric acid] was added into each tube and a color change was watched for. The color changed to violet/purple, if there was bacterial growth. If the color changed to violet/purple in all three tubes, the isolate was identified as methicillin-resistant. If the color changed in growth control tube but not in the test and lyophilized tube, the isolate was identified as methicillin-susceptible. Among 135 isolates tested, 97 had mecA gene and were methicillin-resistant by both microdilution and NRA breakpoint susceptibility method. The remaining 38 clinical isolates did not have this gene and were susceptible to methicillin by both methods used. All results were concordant to the PCR which was considered as the gold standard method. Specificity, sensitivity, positive and negative predictive values were 100%. NRA breakpoint susceptibility test in tubes is an inexpensive and reproducible method. This method can easily be used in many laboratories and does not require skilled personnel. In addition, test tubes are prepared by lyophilisation to provide long shelf-life which gives an important advantage.