Trichomonas vaginalis Klinik İzolatlarında İn Vitro Metronidazol Direncinin Araştırılması

Investigation of In Vitro Metronidazole Resistance in the Clinical Isolates of Trichomonas vaginalis

Özet

Trichomonas vaginalis, ürogenital yerleşimli, kamçılı, anaerobik bir protozoon olup dünya genelinde görülen önemli bir vajinit etkenidir. Metronidazol, trikomoniyaz tedavisinde en sık tercih edilen ilaç olmakla birlikte, birçok ülkede metronidazole dirençli izolatların varlığı bildirilmiş ve yeni tedavi yaklaşımlarına gereksinim olduğu vurgulanmıştır. Ülkemizde farklı etken maddelerin T.vaginalis canlılığına etkisinin araştırıldığı birçok çalışma olmasına karşın, metronidazol direncinin tek bir izolatta araştırıldığı sadece bir çalışmaya rastlanmıştır. Bu çalışmanın amacı, semptomatik trikomoniyazlı kadın hastalardan izole edilen suşlarda in vitro metronidazol direncinin araştırılması ve duyarlı izolatlarda minimum öldürücü dozun (MLD) belirlenmesidir. Çalışma kapsamında; Adnan Menderes Üniversitesi Tıp Fakültesi, Eğitim ve Araştırma Hastanesi Parazitoloji Laboratuvarına 2009-2014 yılları arasında T.vaginalis tanısı için gönderilen semptomatik hastaların vajinal akıntı örneklerinden, %10 fetal dana serumlu triptikaz-mayamaltoz besiyerinde çoğalan izolatlar kullanılmıştır. Bu şekilde elde edilen toplam 40 adet T.vaginalis izolatı kriyoprezervasyon yapılarak saklanmış ve çalışma öncesinde canlandırılarak kullanılmıştır. T.vaginalis trofozoitleri farklı konsantrasyonlarda (200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.56 ?g/ml) metronidazol ile hem aerobik hem de anaerobik koşullarda inkübe edilerek canlılıkları faz-kontrast mikroskobuyla incelenmiştir. Hareket gözlenmeyen izolatlar daha sonra yeni besiyerine alınıp canlılıkları kontrol edilmiştir. Anaerobik koşullarda 15 µg/ml'nin üzeri, aerobik koşullarda ise 75 µg/ml'nin üzeri metronidazol konsantrasyonlarında 48 saatlik inkübasyon sonrası canlılık gözlenenler dirençli olarak kabul edilmiştir. Çalışmamızda değerlendirilen 40 T.vaginalis izolatından üçünün (%7.5) metronidazole dirençli olduğu belirlenmiştir. Metronidazole duyarlı izolatlar için MLD değerlerinin ortalaması aerobik ve anaerobik koşullarında sırasıyla 27.17 µg/ml ve 7.75 µg/ml olarak saptanmıştır. Çalışmamızda bulunan %7.5'lik metronidazol direncinin, diğer ülkelerde bildirilenlerin bir çoğundan daha yüksek olduğu görülmüştür. Bu çalışma, sadece Aydın ilindeki hastalardan elde edilen izolatlarla sınırlı kalmasına karşın, ülkemizde metronidazole dirençli T.vaginalis izolatların varlığını göstermesi bakımından önem taşımaktadır. Türkiye'nin diğer bölgelerinde gerçekleştirilecek benzer çalışmalara ihtiyaç duyulmakta olup, bu veriler genel değerlendirmelerin yapılmasına ve tedavide yeni yaklaşımların geliştirilmesine olanak sağlayacaktır. Ayrıca trikomoniyazda, in vitro metronidazol direnci ve tedaviye klinik yanıtın birlikte değerlendirildiği araştırmaların da gerekli olduğu düşünülmektedir.

Abstract

Trichomonas vaginalis, a flagellated, urogenital anaerobic protozoon is reported as an important cause of vaginitis with a global distribution. Although metronidazole is the primary choice of drug for the treatment of trichomoniasis, the presence of resistant isolates from many different countries highlights the need of novel drugs for the treatment. Many studies from Turkey mostly dealing with the in vitro effects of compounds and natural products against T.vaginalis have been reported, however, only one study has been encountered searching the metronidazole resistance in a single T.vaginalis isolate. The aim of this study was to determine the in vitro metronidazole resistance and minimum lethal concentrations (MLCs) of the isolates from symptomatic cases. T.vaginalis strains isolated from vaginal discharge samples of symptomatic women that were sent to Adnan Menderes University Faculty of Medicine, Research and Training Hospital Parasitology Laboratory, between 2009-2014 period, were included in the study. The strains were isolated by the inoculation of samples into trypticase-yeast-maltose medium supplemented with 10% fetal calf serum. A total of 40 T.vaginalis isolates stored by cryopreservation were revived before the experiments. T.vaginalis trophozoites were incubated with different concentrations of metronidazole (200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.56 ?g/ml) and the viability of cells were examined in both aerobic and anaerobic conditions under phase contrast microscope. Additionally, non-motile isolates were further inoculated into fresh media and viability was checked. The wells containing motile trophozoites after 48 hours of incubation with 15 µg/ml and/or higher metronidazole concentration in anaerobic condition and 75 µg/ml and/or higher metronidazole concentration in aerobic conditions were determined as resistant isolates. Of the 40 T.vaginalis isolates three (7.5%) were resistant to metronidazole. MLC mean values of metronidazole-sensitive isolates were 27.17 µg/ml in aerobic and 7.75 µg/ml in anaerobic conditions. The rate of metronidazole resistance detected in this study was higher than most of reports from different countries. Despite being limited to the isolates from Aydin province (located at Agean region of Turkey), the present study has a value as it presented the existence of metronidazole-resistant isolates in Turkey for the first time. More research from other parts of Turkey is needed to better understand the metronidazole resistance at a national scale and to investigate novel strategies for the treatment. Moreover, further studies need to be carried out in order to clarify the relationship between clinical treatment response and in vitro metronidazole resistance in trichomoniasis.