Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2019 / Cilt: 53 - Sayı: 1
Denizli Bölgesinde Kestane (Castanea sativa) Ağacından Cryptococcus neoformans İzolasyonu
- Sayfa
- 61–69
- DOI
- —
Özet
Bazidiomiçet bir maya mantarı olan Cryptococcus neoformans hayvanlar ve bağışık sistemi baskılı insanlarda hayatı tehdit eden enfeksiyonlara neden olabilmektedir. Çevresel ortam havasında bulunan aerosolize partiküllerin solunması ile C.neoformans/Cryptococcus gattii enfeksiyonlarının oluştuğu düşünülmektedir. Bilinen çevresel kolonizasyon odakları; kanatlı çıkartıları, ağaçlar içindeki çürüyen oyuklar ve topraktır. Son yıllarda Anadolu’nun batı bölgelerinde yapılan çevresel taramalarda Eucalyptus camaldulensis, Tamarix hispida, Platanus orientalis ve Punica granatum gibi farklı ağaçların odunsu yapılarında C.neoformans kolonizasyonu bildirilmiştir. Eldeki verilere göre yapılan tahminler ülkemizin batı bölgelerinde yoğun Cryptococcus kolonizasyon odaklarının olabileceğini öngörmektedir. Bu çalışmada, yüksek rakımlı bölgelerde bulunan kestane (Castanea spp.) ağaçlarında C.neoformans kolonizasyonu varlığını araştırmak amaçlanmıştır. Bu amaçla, Aydın-Denizli-Ödemiş bölgesinde bulunan kestane (Castanea spp.) ağaçlarında C.neoformans kolonizasyonu araştırılmıştır. Çalışma, iki büyük nehir arasında kalan verimli, yüksek rakımlı dağlık arazide yapılmıştır. Bu bölge Anadolu’da yaygın kestane tarımı yapılan bölgeler arasında yer almaktadır. Bu alanda, 2017 yılının yaz aylarında, üzerinde derin yarık veya gövdesinde büyük oyuk bulunan 214 kestane ağacından örnek alınmıştır. Eküvyon tekniği ile alınan örnekler bifenil ve antibiyotik içeren Staib agar besiyerine ekim yapılmıştır. Kültürler on gün süre ile kahverengi koloni kontrolü yapılarak takip edilmiştir. Patojen Cryptococcus izolatlarını tanımlamak için şüpheli koloniler konvansiyonel yöntemler ve kanavanin glisin bromtimol agar reaksiyonu ile incelenmiştir. İzolatın polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) tanısı için ITS 1-4 primerleri kullanılmıştır. Bu amaçla, STE20 (Aa), STE20 (Aα), STE20 (Da) ve STE20 (Dα) primerlerini içeren STE20 PCR paneli ile serotip ve eşeyli şekil saptanmıştır. V8 agar besiyeri eşeyli çaprazlama kültürleri için kullanılmıştır. Çalışmada incelenen 214 ağacın yalnızca bir tanesinde (%0.47) C.neoformans izolasyonu gerçekleşmiştir. Bu izolat ITS 1-4 dizi analizi ile doğrulanmıştır. İzolatın A serotipinde MATα şeklinde olduğu saptanmıştır. V8 agarda MATα yapısına ait bazidiyum, bazidiyosporlar ve hif yapılarındaki kelepçe “klamp” bağlantıları görülmüştür. Bu çalışmada, Denizli’de Anadolu kestane (Castanea sativa) ağacından C.neoformans’ın ilk defa izolasyonu gösterilmiştir. İnsan patojeni kriptokokların çevresel dağılımı ile yapılacak ileri araştırmalar, bölgemizdeki canlılarda risk oluşturan alanların saptanmasında yardımcı olacaktır.
Abstract
Cryptococcus neoformans is a basidiomycetous encapsulated yeast that can cause life-threatening infections in immunosuppressed humans and animals. C.neoformans/Cryptococcus gattii infections are considered to be acquired via inhalation of aerosolized particles from the environment. Avian guano, decaying tree hollows and soil are known as environmental niches. In recent years, colonization of the woody structures of different trees such as Eucalyptus camaldulensis, Tamarix hispida, Platanus orientalis and Punica granatum has been reported in the environmental study of the western Anatolian region. Based on the results of previous studies, our country may have intensive Cryptococcus colonization niches in the western regions. The aim of this study was to investigate the presence of the colonization of C.neoformans niche in chestnut (Castanea spp.) trees on higher altitudes. In the study, the colonization of C.neoformans was screened on chestnut trees (Castanea spp.) in Aydın-Ödemiş-Denizli geographical area. This area consists of mountainous terrain between the fertile plain formed by two major rivers.This region is one of the widespreading areas of chestnut farming in Anatolia. Two hundred and fourteen chestnut trees that had deep fissures or trunk hollows were screened during mid-summer 2017. A swabbing technique was used, and all samples were cultured on Staib agar medium containing biphenyl and antibiotics. Cultures were checked for ten days for suspicious brown colonies. Suspicious yeast colonies were tested for the identification of pathogenic Cryptococcus by conventional methods and canavanine-glycine-bromothymol agar reactions. ITS 1-4 primers were used for strain PCR tests. We determined the mating type and serotypes by PCR analysis of the STE20 genes using STE20 (Aa), STE20 (Aα), STE20 (Da), and STE20 (Dα) primers. V8 agar medium was used for mating cultivation. Only one (0.47%) strain of C.neoformans was isolated from 214 screened trees. This strain was confirmed by ITS 1-4 sequencing. The serotype A MATα mating type was observed. Basidium, basidiospores and clamp connections in hyphal structure were noted with MATα mating on V8 agar medium. In this study, the first C.neoformans isolate from a chestnut tree (Castanea sativa) was determined from Denizli region. Further studies of distribution of human pathogenic Cryptococcus will be helpful to determine the risk areas for the living organisms in our region.