Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2020 / Cilt: 54 - Sayı: 1
İstanbul’daki Yüzme Havuzu Suları ve Biyofilm Örneklerinde Legionella ve Serbest Yaşayan Amiplerin Görülme Sıklığının Farklı Yöntemlerle Araştırılması
- Sayfa
- 50–65
- DOI
- —
Özet
Serbest halde yaşayan ya da biyofilmde bulunan Legionella cinsi bakteriler ve serbest yaşayan amipler (SYA), yüzme havuzları aracılığıyla insanlara bulaşıp çeşitli hastalıklara neden olabilmektedir. SYA, ayrıca Legionella ve diğer bazı bakteriler için konak olma yeteneğinde oldukları için de yüzücülerin sağlığını tehdit edebilmektedir. Bu çalışmada, İstanbul’daki yüzme havuzu suları ve biyofilm örneklerinde toplam aerobik heterotrofik bakteriler (TAHB), SYA ve Legionella bakterilerinin varlığının kültür ve floresan in situ hibridizasyon (FISH) yöntemleri kullanılarak araştırılması amaçlanmıştır. TAHB, Legionella ve SYA’nın kül türü için sırasıyla “water plate count agar (wPCA)”, glisin-vankomisin-polimiksin-sikloheksimit (GVPC) eklenmiş “buffered charcoal yeast extract (BCYE)” agar, Escherichia coli ekilmiş “non-nutrient agar (NNA)” kullanılmıştır. FISH yöntemiyle analiz amacıyla Legionella için floresan boya ile işaretli Leg 705 ve Leg PNE1 probları, Acanthamoeba cinsi SYA için ACANTHA probu kullanılmıştır. Pozitif kontrol olarak Legionella pneumophila serogroup 1 ATCC 33152, L.pneumophila serogroup 3 ATCC 33155, Acanthamo eba castellani ATCC 50373 suşları kullanılmıştır. Su ve biyofilm örneklerinin %92 ve %84’ünde TAHB üre tilmiştir. Su örneklerinin hiçbirinde Legionella bakterileri üretilemediği halde, FISH yöntemiyle 6 (%24) su örneğinde bakteri tespit edilmiştir. Bu bakteriler biyofilm örneklerinin 1 (%4)’inde üretilebildiği halde FISH yöntemiyle 7 (%28)’sinde tespit edilmiştir. SYA, su örneklerinde kültürle %16, FISH analiziyle %28 oranında saptanmıştır. Bu amipler, biyofilm örneklerinde, kültür ve FISH yöntemiyle sırasıyla %8 ve %24 oranında tespit edilmiştir. İzole edilen bir SYA izolatının termotoleran aktiviteye sahip (potansiyel patojen) olduğu bulunmuştur. Bir su ve dört biyofilm örneğinde L.pneumophila serogrup 1 varlığı tespit edilmiştir. Kültür yöntemine göre, TAHB ve SYA’ya su örneklerinde biyofilm örneklerindekine göre daha fazla, Legionella cinsi bakterilere ise biyofilm örneklerinde su örneklerindekine göre daha fazla oranda rastlandığı tespit edilmiştir (p≤ 0.05). Legionella cinsi bakterilerin tespitinde FISH yönteminin kültür yöntemine göre üstün olduğu istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur (p≤ 0.05). Bu çalışma ile dene timi yapılan yüzme havuzlarında TAHB sayısının Sağlık Bakanlığının belirlediği sınırlar içerisinde (≤ 200 kob/ml) olduğu saptanmıştır. TAHB, SYA ve Legionella tespitinde hem su hem de biyofilm örneklerinin incelenmesi yerinde olacaktır. Gerek su gerekse biyofilm örneklerindeki SYA’nın varlığının tespiti için kültür ve FISH yöntemlerinin her ikisinin de kullanılması uygun olabilir. Bu çalışma, İstanbul’daki yüzme havuzlarında Legionella ve SYA’ların varlığının araştırıldığı ilk çalışma olup daha fazla sayıda havuz suyu ve biyofilm örneklerinin inceleneceği yeni çalışmalara gereksinim bulunmaktadır. Elde edilecek veriler sayesinde yüzme havuzlarının sağlık esasları ve denetimleri yeniden ele alınıp, halk sağlığına katkı sağ lanabilecektir
Abstract
Legionella bacteria living in free form or in biofilm and free-living amoebae (FLA) can infect humans through swimming pools and can cause various diseases. FLA may also threaten the health of swimmers because they are capable of being hosts for Legionella and some other bacteria. The aim of this study was to investigate the presence of total aerobic heterotrophic bacteria (TAHB), FLA and Legionella bacteria in swimming pool waters and biofilm samples in Istanbul by using culture and FISH methods. Water plate count agar (wPCA), buffered charcoal yeast extract (BCYE) agar supplemented with glycinevancomycin-polymyxin-cycloheximide (GVPC) and Escherichia coli cultivated non-nutrient agar (NNA) were used for the culture of TAHB, Legionella and FLA. For the FISH method analysis , Leg 705 and Leg PNE1 probes labeled with fluorescent dye for Legionella and ACANTHA probe for Acanthamoeba genus FLA were used. Legionella pneumophila serogroup 1 ATCC 33152, L.pneumophila serogroup 3 ATCC 33155 and Acanthamoeba castellani ATCC 50373 were used as positive controls. TAHB were grown in 92% and 84% of water and biofilm samples. Although Legionella bacteria could not be grown in any of the water samples, it was detected in 6 (24%) water samples by FISH method. Although these bacteria could be grown in 1 (4%) of biofilm samples, 7 (28%) were detected by FISH method. FLA were found to be 16% by culture in water samples and 28% by FISH analysis. These amoebae were detected 8% and 20% in biofilm samples by culture and FISH method, respectively. It was determined that one of the isolates of FLA had thermotolerant activity (potentially pathogenic). L.pneumophila serogroup 1 was detected in one water sample and in four biofilm samples. According to the culture method, TAHB and FLA were found to be more common in water samples than in biofilm samples and Legionella bacteria were more common in biofilm samples than in water samples (p≤ 0.05). In the detection of Legionella bacteria, the superiority of FISH method compared to culture method was found to be statistically significant (p≤ 0.05). In this study, it was found that the number of TAHB in the controlled swimming pools was within the limits determined by the Ministry of Health (≤ 200 cfu/ml). It will be appropriate to examine both water and biofilm samples for the investigation of TAHB, FLA and Legionella. It may be appropriate to use both culture and FISH methods to detect the presence of FLA in water and biofilm samples. This study is the first study to investigate the presence of Legionella and FLA in swimming pools in Istanbul, and further studies are needed to examine more pool water and biofilm samples. With the data obtained, the health principles and controls of swimming pools will be re-considered and will be contributed to public health.