Dergiler / Medical Network Klinik Bilimler ve Doktor / 2003 / Cilt: 9 - Sayı: 5
Plasental fibroblastların izolasyonu, kültürü ve karakterize edilmesi
- Sayfa
- 618–623
- DOI
- —
Özet
Amaç: Bu çalışmanın amacı, ilk üç aylık dönemdeki insap plasentasına ait koriyonik villus dokusundan plasental fibroblastların primer kültür yöntemiyle izole edilmesi, kültürünün yapılması ve karakterize edilmesidir. Bu şekilde plasental fibroblastların feeder-layer olarak hazırlanıp hazırlanamayacağı araştırılacaktır. Gereç ve Yöntem: Bu amaçla ilk aşamada steril koşullar altında koriyonik villus dokusu, membranlardan ve desiduadan dikkatlice ayrıldı. Doku parçaları, tripsin-EDTA solüsyonu kullanılarak tripsinize edildi. Tripsinizasyon sonunda oluşan hücre topluluğu, hücre kültür vasatı ile yıkanarak tripsinden uzaklaştırıldı ve %10 FBS içeren DMEM/F12 içinde süspanse edilerek inkübasyona kaldırıldı. Hücreler konfluent hale geldikten sonra pasajlandı ve dört pasajdan sonra karakterizasyon testleri için kullanıldı. Bu amaçla, ilk olarak dört farklı başlangıç hücre yoğunluğunda hücrelerin üreme özellikleri incelendi ve üreme eğrileri çıkartıldı, ikinci olarak, plating efficiency ve yumuşak ağar teknikleri kullanılarak hücrelerin koloni oluşturma kapasitelerine bakıldı. Son olarak da, değişik serum konsantrasyonlarında plasental fibroblastların üreme özellikleri incelendi. Bulgular: Sonuçlar, plasental fibroblastların, I. Grupta en fazla olmak üzere, yüksek üreme kapasitesine sahip olduklarını gösterdi. Bununla birlikte, plating efficiency ve yumuşak ağar testleri, bu hücrelerin koloni oluşturamadıklarını gösterdi. Değişik serum konsantrasyonları ile hücrelerin kültürünün yapıldığında ise, bu hücrelerin üremesi için en uygun serum konsantrasyonunun %20 olduğu saptandı. Sonuç: Bu bulgular, plasental fibroblast hücrelerinin bundan sonraki çalışmalarda fibroblast feeder-layer olarak hazırlanması için uygun özellikte olduğunu gösterdi. Bu şekilde plasental trofoblast hücrelerinin fibroblast feeder-layer üzerinde üretilmesi ve plasental hücrelerin fonksiyonlarının incelenmesi için bir in vitro perfüzyon sisteminin kurulması planlanmaktadır.
Abstract
Objective: The aim of this study is to isolate placental fibroblasts from chorionic villous tissue, culture and characterize. Materials and Methods: For this purpose, placental fibroblasts were isolated from chorionic villous tissue of first trimester öf human placenta. In the first step, chorionic villous tissue was carefully dissected free of membranes and decidua under sterile conditions. In the second step, tissue fragments were trypsinized for 1 hour at 37aC by using 0,25% trypsin-EDTA solution and cell pellets were resuspended in DMEM/F12 and cells were incubated in 25 cm2 flask in humified (5% CO2 and 95% O2) air at 37QC. When the cells became confluent, they were passaged. After four passages, the placental fibroblasts were used for characterization tests. For this purpose, in the first step, cell growth was determined at four different initial cell seeding densities and growth curves were obtained. In the second step, plating efficiency and soft agarose test were did to investigate colony formation of placental fibroblasts were incubated in four different serum concentrations and growth curves were obtained. Results: Results showed that placental fibroblasts had a high growth capacity in Group I. Plating efficiency and soft agar tests were showed that there was no colony formation. And the results also showed that the best serum concentration to grow placental fibroblast cells is 20%. Conclusion: The results showed that placental fibroblasts had high growth capacity. But they hadn't got ability of colony formation under normal conditions. According to these results, placental fibroblasts can be used to prepare fibroblast feeder-layer.