Dergiler / Iğdır Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi / 2018 / Cilt: 8 - Sayı: 3
Dereotundan (Anethum graveolens) Saflaştırılan Polifenol Oksidaz (PFO) Enziminin Bazı Killerle İmmobilizasyonu
- Sayfa
- 191–199
- DOI
- —
Özet
Bu çalışmada dereotundan (Anethum graveolens) Polifenol oksidaz enzimi (PFO) kısmi saflaştırılarakbazı killere immobilize edilerek bazı özellikleri incelenmiştir. Bu amaçla önce dört farklı substrat için, optimumpH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet belirlendi. Daha sonra belirlenen optimum şartlarda bu substratlariçin KM ve Vmax değerleri tespit edildi. İmmobilizasyon işlemi için farklı miktarlarda killer alınıp, 1 ml tamponçözelti içerisine 0.5 ml enzim ilave edilerek bir karışım oluşturulmuş daha sonra vortexlenerek immobilizasyonişlemi gerçekleştirilmiştir. PFO enzim aktivitesi, katekol substratı varlığında 420 nm de spektrofotometrik yöntemkullanılarak ölçülmüştür. Bu aktivitelerden yararlanarak IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplanmıştır.Konsantrasyona bağlı olarak kil içindeki enzimin inhibisyon yüzdeleri hesaplanmıştır. Buna göre; 0.066 g mL-1;0.040 g mL-1; 0.020 g mL-1; 0.0133 g mL-1; 0.0066 g mL-1 ve 0.0033 g mL-1 konsantrasyonlarında üç farklı kildennumuneler hazırlanmıştır. İmmobilize edilen enzim aktiviteleri, serbest enzim aktivitelerine göre yukarıdaki kilkonsantrasyonlarında yeşil kil ile sırasıyla; %92, %86, %80, %75, %70 ve %68, sarı kil ile sırasıyla ; %80, %79,%76, %75, %70 ve %69 kırmızı kil ile sırasıyla; %84, %81, %77, %72, %66 ve %65 inhibisyona uğradıkları veyeşil kilin dereotu PFO enzimini diğer kırmızı ve sarı killere göre daha kuvvetle immobilize olduğu bulunmuştur.
Abstract
In this study, certain properties of Poliphenol oxidase enzyme (PFO) was investigated after theenzyme was purified from dill and immobilized by certain clays. Optimum pH, temperature and ionic strengthfor four different substrates were determined. KM ve Vmax values for the substrates at optimum conditions wereestablished. Immobilization was achieved by vortex after adding 0.5 mL enzyme to different amounts of clay and 1mL buffer. PFO activity was measured spectrophotometrically at 420 nm using chatecol as the substrate. From themeasurements the IC50 ve Ki values for the activity was calculated.The percentage inhibition of the enzyme isolated from dill was calculated from various concentrations. Theconcentrations for three different clay samples were as follow: 0.066 g mL-1; 0.040 g mL-1; 0.020 g mL-1; 0.0133 gmL-1; 0.0066 g mL-1 ve 0.0033 g mL-1. Activity for the immobilized enzyme for the selected concentrations of thethree various clays are as follow: green clay; 92%, 86%, 80%, 75%, 70% , 68% yellow clay; 80%, 79%, 76%, 75%,70%, 69% ve red clay; 84%, 81%, 77%, 72%, 66%, 65%. These results suggest that PFO from dill are strongerimmobilized by green clay compared to PFO immobilized by red and yellow clay.